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本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行实时荧光定量 PCR 的专用试剂,将热启动Taq DNA 聚合酶、dNTP、Mg
2+、SYBR Green I、反应缓冲液和稳定剂等试剂预混成即用的2×Mix,可对目标 cDNA 进行快速并具有高特异性的定量检测。采用抗体法热启动Taq 酶,高温加热前,抗 Taq 单克隆抗体与 Taq 酶紧密结合,抑制 Taq 的聚合酶活性,从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗体在PCR 反应的预变性步骤中会完全失活,不干扰后续的 Taq 酶聚合反应,大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。
本产品中含有通用 ROX,适用于所有 qPCR 仪器,无需在不同的仪器上调整ROX浓度,只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。最大限度地减少人为误差、降低污染机率、节约实验操作时间,快速简便、通用性广、灵敏度高、特异性强、稳定性好。产品组成:
编号 组分 规格BL1363A 2×Universal SYBR qPCR Master Mix (Universal ROX Premixed) 5×1 mL保存条件:
收到本产品后,请立即置于-20℃避光保存,两年有效。避免反复冻融。如果经常使用,可置于 4℃保存至少 3 个月。 使用说明:
一、Real-Time PCR 反应体系配制 :
将所有试剂 2×Universal SYBR qPCR Master Mix (Universal ROX Premixed),模板,引物和RNase-Free ddH2O,在室温下融解并彻底混匀,避免产生气泡。短暂离心后,置于冰上按照下表配制反应液。
参考下表配制反应体系:
组分 20 µL 体系 50 µL 体系DNA 模板①
1 µL 1 µL
正向引物(10 μM)
②
0.5 µL 1 µL
反向引物(10 μM)
②
0.5µL 1 µL
2×Universal SYBR qPCR Master Mix
(Universal ROX Premixed) 10 µL 25 µL
RNase-Free ddH2O 补足至 20 µL 补足至50 µL
①模板量:10-100 ng 基因组 DNA,或 1-10 ng cDNA 为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。另外,Two StepRT-PCR 反应的 cDNA(RT 反应液)作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的10%