特性

 3´ →5´ 外切酶活性

 非定向巢式缺失

 定点突变

 链特异性探针的制备
 制备用于双脱氧测序的单链底物

概述

该酶作用于双链 DNA，从 3´ OH 末端方向逐步切去单核苷酸。每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。

尽管可以作用于双链 DNA 的切刻产生单链缺口，但该酶最适底物是平齐末端或 3´ 凹陷末端 DNA。由于对单链 DNA 无活性，因此该酶无法切割 3´ 突出末端。3´ →5´ 外切酶活性对底物的切割程度随 3´ 突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端完全不能被切割。这种特性可以用于对一端为抗性位点（3´ 突出端），另一端是敏感位点（平端或 5´ 突出端）的线性 DNA 分子进行单方向切割。

核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。温度、盐浓度和酶与 DNA的比例对酶活性影响很大，应根据不同的反应调整反应条件。

据报道，核酸外切酶 III 也有 RNase H、3´ -磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。

来源

纯化自 E. coli K-12，BE257/pSGR3 菌株（B.Weiss 惠赠）。

反应条件

1X NEBuffer 1

[10 mM Bis Tris 丙烷-HCl，10 mM MgCl₂，1 mM DTT（pH 7.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：70℃ 加热 20 分钟。

质保声明

核酸外切酶 III 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

单位定义

1 单位指 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟催化产生 1 nmol 酸溶性总核苷酸所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

浓度

100,000 units/ml。

注意事项

核酸外切酶 III 不能切割硫代磷酸酯键。因此，也可以通过引入一个 α-硫代磷酸核苷酸将 DNA 分子的一端保护起来，以进行单向切割。

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。