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MEM ALPHA 含L-谷氨酰胺、核苷和脱氧核苷培养基基本成分和保存
无机盐;培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠,钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ~320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。
缓冲系统;培养基大多数细胞所需pH值 在 7.2 - 7.4。但是,细胞培养zui适pH 值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH值 (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH 值(7.0 - 7.4)。
由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2 体系进行缓冲,因此,气相中的CO2 浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3 的加入量为1.97g/L;如果CO2 浓度维持在10%,培养液中NaHCO3 的加入量为3.95g/L。
细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES 引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH 指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。