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目前已经保藏有近千种各类质粒载体菌株,均经过多重鉴定。涵盖大肠杆菌,哺乳细胞、酵母、昆虫、植物等各种表达系统。我们将会继续整理质粒信息,收集更多的质粒,更好的为科研服务!
使用说明:
1、收到质粒后请先5000rpm离心1min,以使壁上的质粒聚集管底;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴5min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,220rpm震荡培养1h;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清,并混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,用涂棒涂匀;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养培养12-16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12-16h,根据实验需要提取质粒。
注意事项:
1.转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
2.如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
98.如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。