产品描述:

SMM 293-TIS培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293家族的HEK293EBNA及相关的细胞（如HEK293-F、HEK293H 、HEK293T、HEK293S、HEK293FT）的长期生长和瞬时转染。

SMM 293-TIS不含L-谷氨酰胺，使用时需加入4mM的L-谷氨酰胺。其化学成分明确，主要包含细胞生长所需的无机盐， HEPES， 碳酸氢钠， 必需和非必需氨基酸， 维生素， 酚红， 微量元素， PluronicÒ F-68和其他无机物（注意：此培养基不包含抗生素以及血清）。

产品特点:

产品参数:

SMM 293-TIS培养基为澄清红色透明液体，2~8℃避光保存，如发现培养基变得浑浊或出现沉淀，请勿使用。

产品使用效果:

产品使用方法:

细胞复苏：

迅速取出冻存的细胞，在37 ℃水浴条件下进行解冻（可以在水中轻轻晃动，时间控制在30s以内）；

轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至50 mL无菌离心管中，逐滴加入10 mL预热到37℃的培养基，离心换液（100 g，5 min）去除全部上清，加入293新鲜培养基重悬，使得细胞密度达到0.4~0.6×106cells/mL；

将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110~175rpm的恒温摇床中进行培养；

2-5天后通过人工或仪器测定细胞的密度以及活率，如果细胞密度达到1.0×106cells/mL，活率85%以上则可进行传代培养；

如果细胞密度低于1.0×106cells/mL，则建议对细胞进行离心（100g，5min），然后重悬于20-30mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6×106cells/mL ，并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。

细胞转染：

在SMM 293-TIS培养基中，用Sinofection®转染试剂（货号STF01），可以实现 HEK293 细胞的高转染效率。具体细节可以参考Sinofection® 转染试剂说明书或者登陆我们的官网（old.sinobiological.cn）进行查阅。

细胞驯化：

悬浮的HEK293 cells几乎不用驯化就可直接适应SMM 293-TIS培养基。如果直接更换培养基失败则推荐下面两种方式来驯化HEK293细胞使其适应SMM 293-T1培养基：1）直接驯化；2）逐步驯化。

1）直接驯化：

将培养在加有5~10%血清的传统培养基或其他无血清培养基里的细胞，直接稀释传代到SMM 293-TIS培养基中，细胞密度控制在0.3~0.4×106cells/mL；

将细胞置于37 ℃，5% CO2，转速为110~175 rpm的恒温摇床中进行培养；

4~6天后对细胞培养液进行稀释（或者离心更换上清），保持稀释（或者离心）后细胞密度为0.3~0.4×106 cells/mL；

经过在100%的 SMM 293-TIS培养基中的几次传代培养，传代后4~6天细胞的密度可以达到2~3×106 cells/mL，细胞活率大于90%。这说明细胞已经完全适应了SMM 293-TIS培养基，之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.2~0.3×106/ml左右。

注意:如果直接驯化效果欠佳，可采用逐步驯化的方法。

2）逐步驯化：

将培养在加有5~10%血清的传统培养基或其他无血清培养基里的细胞，直接稀释传代到SMM 293-TIS培养基中，细胞密度控制在0.3~0.4×106cells/mL，原培养基与SMM 293-TIS培养基的比例为75:25；

将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175rpm的恒温摇床中进行培养；

4~6天后进行传代，如果细胞生长状态良好，且活率>90% 则传代时原培养基与SMM 293-TIS培养基的比例为50:50，细胞密度仍控制在0.3~0.4×106cells/mL。如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80% 的5~10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与SMM 293-TIS培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养；

重复步骤3逐步增加SMM 293-TIS培养基所占的比例（原培养基与SMM 293-TIS培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的SMM 293-TIS培养基；

经过在100%的 SMM 293-TIS培养基中的几次传代培养，传代后4~6天细胞的密度可以达到2~3×106cells/mL，细胞活率大于90%。这说明细胞已经完全适应了SMM 293-TIS培养基，之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.2~0.3×106cells/mL。

注意:一般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但一般从第四代开始状态会有改善。

细胞冻存：

冻存细胞时，要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells ；

事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积；

制备细胞冻存液：50% 的新鲜SMM 293-TIS培养基+50% 条件SMM 293-TIS培养基，混合之后再加入7.5% DMSO，存放在4℃，一般为当天用当天制备；

对细胞样品进行计数；

取样计数，以100 g，3~5 min的条件离心收集细胞，然后用冻存培养基（ 4 ℃ ）重悬细胞，使得细胞密度为 5~10×106 cells/mL；

取样计数，调整细胞密度；迅速分装细胞到无菌的冻存管中，一般2 mL 的冻存管放1~1.5 mL，贴好标签，密封；

将细胞冻存管放到程序降温冻存盒（注意填充异丙醇，4 ℃预冷）中，置于-80℃ 冰箱(每分钟下降1 ℃)，过夜存放后将细胞一如液氮罐中进行保存。

已发表文献:

Peilong Lu, Xiao-chen Bai, DanMa, Tian Xie. et al. Three-dimensional structure of human γ-secretase. Nature. 2014 Jun 29. doi:10.1038/nature13567.

Xie T, Yan C, Zhou R, , Shi Y, et al. Crystal structure of the γ-secretase component nicastrin. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Sep 16;111(37):13349-54. doi: 10.1073/pnas.1414837111. Epub 2014 Sep 2..

Shangyu D, Shenjie W, Shi Y, et al. Cleavage of amyloid precursor protein by an archaeal presenilin homologue PSH.Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Mar 17; 112(11): 3344–3349.

Sun L, Zhao L, Yang G, Shi Y, et al. Structural basis of human γ-secretase assembly. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 May 12;112(19):6003-8. doi: 10.1073/pnas.1506242112. Epub 2015 Apr 27.

Bai XC, Yan C, Yang G , Shi Y, et al. An atomic structure of human γ-secretase. Nature. 2015 Aug 17. doi: 10.1038/nature14892.