
碧云天研发的pT3/SP6/T7-RNA-Template (体外转录质粒)是碧云天研发的一种用于体外基于T3、SP6或T7 Promoter进行RNA转录的模板质粒。该质粒中的PstI/SacI位点反向插入了人β-actin基因的125bp cDNA片段(X00351的823-947核苷酸片段),不仅可以作为插入目的基因用于体外转录的模板质粒,也可以作为体外转录的阳性对照。体外转录的RNA可以用于mRNA疫苗、体外蛋白翻译、转染细胞用于目的基因的表达、体外研究翻译调控机制、体外研究RNA降解机制、蛋白与RNA的相互作用等。
当本质粒用HindIII等插入片段后边的限制性内切酶线性化处理之后,就可作为体外转录的模板。
本质粒用HindIII线性化之后,当使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶进行体外转录时,获得的RNA的长度分别为221nt、198nt和175nt,并且获得的RNA是与人β-actin mRNA互补的。推荐使用碧云天生产的R7006 SP6 RNA Polymerase、R7009 T3 RNA Polymerase和R7012 T7 RNA Polymerase。
本质粒线性化之后转录产生的RNA可用作核糖核酸酶和S1核酸酶保护试验的探针,也可以在Northern blot和Dot blot中作为内参或用于建立每个样品中RNA相对量的参考等。
pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
Ampicillin promoter | 96-200 |
Ampicillin resistance ORF | 201-1061 |
ori | 1232-1820 |
lac promoter | 2144-2174 |
lac operator | 2182-2198 |
M13 reverse primer binding site | 2206-2222 |
T3 promoter | 2238-2257 |
SP6 promoter | 2261-2280 |
T7 promoter | 2284-2303 |
β-actin-125-Human Antisense Template | 2327-2451 |
Multiple cloning site | 2307-2326/2452-2480 |
M13 forward primer binding site | 2484-2500 |
pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒(2878bp)的图谱如下:

pT3/SP6/T7-RNA-Template的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2310 pT3/SP6/T7-RNA-Template (RNA体外转录质粒).pdf。
pT3/SP6/T7-RNA-Template中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pT3/SP6/T7-RNA-Template)包括:
AatII | G,ACGT`C | 65 | HindIII | A`AGCT,T | 2476 |
Acc65I | G`GTAC,C | 2315 | KasI | G`GCGC,C | 2639 |
AflIII | A`CRYG,T | 1876 | KpnI | G,GTAC`C | 2135 |
AhdI | GACNN,N`NNGTC | 987 | NarI | GG`CG,CC | 2640 |
AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1464 | NdeI | CA`TA,TG | 2692 |
AvaI | C`YCGR,G | 2458 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 838 |
BamHI | G`GATC,C | 2463 | NotI | GC`GGCC,GC | 2308 |
BanII | G,RGCY`C | 2452 | PciI | A`CATG,T | 838 |
BcgI | ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` | 450 | PluTI | G,GCGC`C | 2308 |
BmgBI | CAC|GTC | 2374 | PstI | C,TGCA`G | 1876 |
BpmI | CTGGAG(N)14,NN` | 917 | SacI | G,AGCT`C | 2639 |
BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 922 | SacII | CC,GC`GG | 2321 |
BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 2008 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2452 |
BseYI | C`CCAG,C | 1527 | ScaI | AGT|ACT | 2312 |
BsoBI | C`YCGR,G | 2458 | SfoI | GGC|GCC | 1993 |
BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1993 | SmaI | CCC|GGG | 507 |
BsrFI | R`CCGG,Y | 903 | SspI | AAT|ATT | 2461 |
BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 2693 | TspMI | C`CCGG,G | 2460 |
BtgI | C`CRYG,G | 2311 | XbaI | T`CTAG,A | 183 |
EagI | C`GGCC,G | 2308 | XmaI | C`CCGG,G | 2458 |
Eco53kI | GAG|CTC | 2454 | XmnI | GAANN`NNTTC | 388 |
EcoO109I | RG`GNC,CY | 8 | |||
EcoRI | G`AATT,C | 2232 |
pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
M13 forward primer (2484-2500): 5´-GTAAAACGACGGCCAGT-3´
M13 reverse primer (2206-2222): 5´-CAGGAAACAGCTATGAC-3´
pT3/SP6/T7-RNA-Template的全序列信息:D2310 pT3_SP6_T7-RNA Template全序列.txt