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pT3/SP6/T7-RNA-Template (RNA体外转录质粒)
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  • 货号 D2310-1μg
  • 品牌 Beyotime/碧云天 ( 生产厂家 )
  • CAS号 见包装
  • 规格/包装 1μg
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碧云天研发的pT3/SP6/T7-RNA-Template (体外转录质粒)是碧云天研发的一种用于体外基于T3、SP6或T7 Promoter进行RNA转录的模板质粒。该质粒中的PstI/SacI位点反向插入了人β-actin基因的125bp cDNA片段(X00351的823-947核苷酸片段),不仅可以作为插入目的基因用于体外转录的模板质粒,也可以作为体外转录的阳性对照。体外转录的RNA可以用于mRNA疫苗、体外蛋白翻译、转染细胞用于目的基因的表达、体外研究翻译调控机制、体外研究RNA降解机制、蛋白与RNA的相互作用等。

当本质粒用HindIII等插入片段后边的限制性内切酶线性化处理之后,就可作为体外转录的模板。

本质粒用HindIII线性化之后,当使用T3 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶或T7 RNA聚合酶进行体外转录时,获得的RNA的长度分别为221nt、198nt和175nt,并且获得的RNA是与人β-actin mRNA互补的。推荐使用碧云天生产的R7006 SP6 RNA PolymeraseR7009 T3 RNA PolymeraseR7012 T7 RNA Polymerase

本质粒线性化之后转录产生的RNA可用作核糖核酸酶和S1核酸酶保护试验的探针,也可以在Northern blot和Dot blot中作为内参或用于建立每个样品中RNA相对量的参考等。

pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
Ampicillin promoter 96-200
Ampicillin resistance ORF 201-1061
ori 1232-1820
lac promoter 2144-2174
lac operator 2182-2198
M13 reverse primer binding site 2206-2222
T3 promoter 2238-2257
SP6 promoter 2261-2280
T7 promoter 2284-2303
β-actin-125-Human Antisense Template 2327-2451
Multiple cloning site 2307-2326/2452-2480
M13 forward primer binding site 2484-2500

pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒(2878bp)的图谱如下:

pT3/SP6/T7-RNA-Template的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2310 pT3/SP6/T7-RNA-Template (RNA体外转录质粒).pdf

pT3/SP6/T7-RNA-Template中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pT3/SP6/T7-RNA-Template)包括:

AatII G,ACGT`C 65 HindIII A`AGCT,T 2476
Acc65I G`GTAC,C 2315 KasI G`GCGC,C 2639
AflIII A`CRYG,T 1876 KpnI G,GTAC`C 2135
AhdI GACNN,N`NNGTC 987 NarI GG`CG,CC 2640
AlwNI CAG,NNN`CTG 1464 NdeI CA`TA,TG 2692
AvaI C`YCGR,G 2458 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 838
BamHI G`GATC,C 2463 NotI GC`GGCC,GC 2308
BanII G,RGCY`C 2452 PciI A`CATG,T 838
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 450 PluTI G,GCGC`C 2308
BmgBI CAC|GTC 2374 PstI C,TGCA`G 1876
BpmI CTGGAG(N)14,NN` 917 SacI G,AGCT`C 2639
BsaI GGTCTCN`NNNN, 922 SacII CC,GC`GG 2321
BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 2008 SapI GCTCTTCN`NNN, 2452
BseYI C`CCAG,C 1527 ScaI AGT|ACT 2312
BsoBI C`YCGR,G 2458 SfoI GGC|GCC 1993
BspQI GCTCTTCN`NNN, 1993 SmaI CCC|GGG 507
BsrFI R`CCGG,Y 903 SspI AAT|ATT 2461
BstAPI GCAN,NNN`NTGC 2693 TspMI C`CCGG,G 2460
BtgI C`CRYG,G 2311 XbaI T`CTAG,A 183
EagI C`GGCC,G 2308 XmaI C`CCGG,G 2458
Eco53kI GAG|CTC 2454 XmnI GAANN`NNTTC 388
EcoO109I RG`GNC,CY 8
EcoRI G`AATT,C 2232

pT3/SP6/T7-RNA-Template质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

M13 forward primer (2484-2500): 5´-GTAAAACGACGGCCAGT-3´

M13 reverse primer (2206-2222): 5´-CAGGAAACAGCTATGAC-3´

pT3/SP6/T7-RNA-Template的全序列信息:D2310 pT3_SP6_T7-RNA Template全序列.txt

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