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pT7-N-His-WELQ
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  • 货号 D5008-1μg
  • 品牌 Beyotime/碧云天 ( 生产厂家 )
  • CAS号 见包装
  • 规格/包装 1μg
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pT7-N-His-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端含有His标签(His tag)融合蛋白的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有WELQ Protease (P2311)酶切位点,可通过WELQ Protease切除N端的His标签。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面,带有一个His标签的编码序列,含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。

本质粒在His标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。

通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。

本质粒为卡那霉素抗性。

pT7-N-His-WELQ质粒(5301bp)的图谱如下:

pT7-N-His-WELQ质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 560-1375
pBR322 origin 1497-2085
lacI coding sequence 3515-4597
lacI promoter 4598-4675
T7 promoter 4988-5006
lac operator 5007-5031
His tag coding sequence 5079-5096
WELQ site 5109-5120
Multiple cloning site (PstI-XhoI) 5115-5162
T7 Terminator 5229-5276

pT7-N-His-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5008 pT7-N-His-WELQ.pdf

pT7-N-His-WELQ中没有的酶切位点包括:

AarI AatII AbsI Acc65I AflII AgeI AhdI
AleI AscI AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI
BmtI BplI BsaI BseRI BsiWI BspMI BsrGI
BstBI Bsu36I CspCI DraI EagI Eco53kI FalI
FseI I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI KpnI MauBI
MfeI MreI MscI NcoI NheI NotI PacI
PasI PI-PspI PI-SceI PmeI PmlI PspXI PsrI
RsrII SacI SacII SbfI ScaI SexAI SfiI
SgrDI SnaBI SpeI SrfI StuI SwaI ZraI
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