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pT7-N-His-SUMO-WELQ
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  • 货号 D5010-1μg
  • 品牌 Beyotime/碧云天 ( 生产厂家 )
  • CAS号 见包装
  • 规格/包装 1μg
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pT7-N-His-SUMO-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化,而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠,增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签,也可以通过WELQ Protease (P2311)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。

本质粒含有T7启动/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。

本质粒在N端SUMO标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签和SUMO标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。

可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。

本质粒为卡那霉素抗性。

pT7-N-His-SUMO-WELQ质粒(5637bp)的图谱如下:

pT7-N-His-SUMO-WELQ质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 560-1375
PBR322 origin 1497-2085
LacI coding sequence 3515-4597
LacI promoter 4598-4675
T7 promoter 4988-5004
lac operator 5007-5031
RBS 5046-5068
His tag coding sequence 5088-5105
PreScission recognition site sequence   5115-5138
SUMO tag coding sequence 5151-5444
WELQ site 5454-5465
Multiple cloning site (PstI-XhoI) 5460-5498
T7 Terminator 5565-5612

pT7-N-His-SUMO-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5010 pT7-N-His-SUMO-WELQ.pdf

pT7-N-His-SUMO-WELQ中没有的酶切位点包括:


AarI AatII AbsI Acc65I AgeI AhdI AscI
AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BplI BsaI
BseRI BsiWI BspMI BsrGI BstBI Bsu36I CspCI
EcoRV FalI FseI I-CeuI I-PpoI I-SceI KflI
KpnI MauBI MfeI MreI MscI NcoI PacI
PasI PI-PspI PI-SceI PmeI PmlI PsrI RsrII
SacII SalI SbfI ScaI SexAI SfiI SgrDI
SnaBI SpeI SrfI StuI SwaI ZraI
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