
pT7-N-His-SUMO-WELQ是碧云天研发的一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化,而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠,增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签,也可以通过WELQ Protease (P2311)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。
本质粒含有T7启动/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) (ST098/ST1416)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。
本质粒在N端SUMO标签后含有WELQ Protease识别的四肽序列W-E-L-Q↓X (Trp-Glu-Leu-Gln↓X,X为任意氨基酸),该识别位点上含有Pst Ⅰ酶切位点,便于构建不含有额外氨基酸的融合蛋白。因此,可以利用WELQ Protease酶切除去目的蛋白N端的His标签和SUMO标签,且目的蛋白N端不会保留额外的氨基酸[1]。
可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。
本质粒为卡那霉素抗性。
pT7-N-His-SUMO-WELQ质粒(5637bp)的图谱如下:

pT7-N-His-SUMO-WELQ质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
f1 origin | 12-467 |
Kanamycin resistance ORF | 560-1375 |
PBR322 origin | 1497-2085 |
LacI coding sequence | 3515-4597 |
LacI promoter | 4598-4675 |
T7 promoter | 4988-5004 |
lac operator | 5007-5031 |
RBS | 5046-5068 |
His tag coding sequence | 5088-5105 |
PreScission recognition site sequence | 5115-5138 |
SUMO tag coding sequence | 5151-5444 |
WELQ site | 5454-5465 |
Multiple cloning site (PstI-XhoI) | 5460-5498 |
T7 Terminator | 5565-5612 |
pT7-N-His-SUMO-WELQ的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D5010 pT7-N-His-SUMO-WELQ.pdf
pT7-N-His-SUMO-WELQ中没有的酶切位点包括:
AarI | AatII | AbsI | Acc65I | AgeI | AhdI | AscI |
AvrII | BaeI | BbvCI | BfuAI | BmgBI | BplI | BsaI |
BseRI | BsiWI | BspMI | BsrGI | BstBI | Bsu36I | CspCI |
EcoRV | FalI | FseI | I-CeuI | I-PpoI | I-SceI | KflI |
KpnI | MauBI | MfeI | MreI | MscI | NcoI | PacI |
PasI | PI-PspI | PI-SceI | PmeI | PmlI | PsrI | RsrII |
SacII | SalI | SbfI | ScaI | SexAI | SfiI | SgrDI |
SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | SwaI | ZraI |