RIPA裂解液(中)

10ml/38 30ml/88 100ml/198

博士德RIPA裂解液是最可靠的缓冲液之一，其主要成分含1% NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS，该缓冲液能够提取细胞质蛋白，细胞膜蛋白和细胞核蛋白，且与许多应用相容，包括报告分析， 蛋白质分析，免疫分析和蛋白质纯化等。RIPA裂解液不含蛋白酶或磷酸酶抑制剂，如果需要，可将酶抑制 剂添加到试剂中以防止蛋白质水解并维持蛋白质的磷酸化状态。一些蛋白激酶和其他酶对RIPA裂解液的组 分敏感，导致其活性降低。在这种情况下，准备不含脱氧胆酸钠和SDS的RIPA裂解液。

收到产品后请与4℃保存，产品需用冰袋运输。

使用方法:
取适当量的裂解液，放与4℃预冷，使用前数分钟内需加入酶抑制剂。
对于细胞：
1.贴壁细胞，细胞刮刮下细胞，计数，并收集5×106 个细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，用预冷的PBS重悬细胞，600g 离心5分钟收集细胞，尽量吸尽上清，加入0.5ml的预冷的裂解液，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。
注意：可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞，具体操作如下，
用移液枪小心吸去培养液，加入适量的预冷的PBS，用移液枪小心吸去PBS，按照下表加入裂解液，冰上孵育30分钟。将裂解液转入离心管中， 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。
板规格/表面积 试剂用量 100mm 500~1000ul 60mm 250~500ul 6-well plate 200~400ul per well 24-well plate 100~200ul per well 96-well plate 50~100ul per well
2.悬浮细胞，计数，并收集5×106 个细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，用预冷的PBS重悬细胞，600g 离心5分钟收集细胞，尽量吸尽上清，加入0.5ml的预冷的裂解液，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。
对于组织：
1. 手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，洗净组织血迹，用滤纸吸干组织表面液体，将组织切成几个较小的组织块。
2. 称量组织，按组织净重(g)：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆 ，(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。
3. 匀浆器匀浆,肉眼观察无明显组织块，冰上孵育30分钟。
4. 10000g离心10分钟,取上清，即为蛋白提取物。

RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等

1% NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS

注意事项：
1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
2.裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不建议用Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
3.裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NFKB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。