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产品解说
试剂盒内含
产品概述
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST®是通过测定细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶 (LDH) 活性进而测定细胞损害的试剂盒。LDH是存在于细胞质的一种酶，当细胞膜受到损伤时，LDH会释放到培养基中。由于释放出的LDH稳定，检 测培养基中LDH量可以作为测定死细胞和受损细胞数量的指标。本试剂盒可以测定受损细胞所释放出的LDH，其原 理是LDH催化乳酸生成丙酮酸和NADH，NADH通过电子载体可将水溶性四唑盐WST® (无色) 还原成甲臜产物 (橙色)， WST®甲臜产物的吸光度与LDH量呈正比，利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。
本试剂盒中试剂不会和活细胞反应，而且对细胞无损害，可以直接添加到含有细胞的培养基中检测 (一步法)。也可以分离细胞后，加到培养基中检测 (低损伤法，分离的细胞可以做其他实验)。本试剂盒采用稳定性高的WST®，配制后的溶液可以长时间保存，不需要现配现用，适用于高通量筛选。
原理
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST®是通过测定细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)活性进而测定细胞损害的试剂盒。LDH（乳酸脱氢酶）是存在于细胞质的一种酶，当细胞膜受到损伤时，LDH 会释放到培养基中。由于释放出的LDH 稳定，检测培养基中LDH 的量可以作为测定死细胞和受损细胞数量的指标。
本试剂盒可以测定受损细胞所释放出的LDH，其原理是LDH 催化乳酸生成丙酮酸和NADH，NADH 通过电子载体可将水溶性四唑盐WST®（无色）还原成甲臜产物（橙色），WST®甲臜产物的吸光度与LDH 的量呈正比，利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。
本试剂盒中试剂不会和活细胞反应，而且对细胞无损害，可以直接添加到含有细胞的培养基中检测（一步法）。也可以分离细胞后，加到培养基中检测（低损伤法，分离的细胞可以做其他实验）。本试剂盒采用稳定性高的WST®，配置后的溶液可以长时间保存6个月，不需要现配现用，适用于高通量筛选。
产品特点
-双重选择：有2种检测方法（一步法、低损伤法）
-操作简单：不需要分离死细胞和活细胞，就可检测死细胞的LDH ＊一步法
-仪器常用：采用常规酶标仪检测
-稳定方便：Working Solution可冷藏保存6个月，不需要现配现用
-双重验证：配合使用CCK-8可获得死细胞和活细胞的结果
操作示意图
本试剂盒不与细胞内的LDH反应，因此可选择两种检测方法。
1、一步法，直接添加的培养基中检测（左）
2、低损伤法，取上清液检测（右）
工作液稳定性
配制后的工作液，可冷藏保存6个月，无需现配现用
CCK-8与LDH
Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST®同时检测细胞毒性
使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标，Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标，实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用，能更全面的表征细胞毒性。
本文为LDH法检测细胞毒性的相关研究介绍。 [相关介绍链接]
实验例
RAJI细胞CDC实验
实验证实：吸光度O.D.值与抗体浓度成正相关，因此确认CD20抗体与细胞结合而激活细胞损伤
常见问题Q&A
Q1：可以使用490 nm以外的滤光片吗？ |
A1：可以使用450 nm滤光片，吸光度会高于490 nm。 |
Q2：细胞毒性检测时，Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST和Cell Counting Kit-8法结果一致吗？ |
A2：二者测定的原理和指标不同，建议同时检测。可更好说明问题。 Cell Counting Kit-8：检测细胞活性 |
Q3：LD50差异性过大，如何处理？ |
A3：细胞状态不同，对药物的耐受性也会有很大变化，最终影响LD50的数值。请尽可能使用相同条件下处理、相同代数的细胞。在准备药物稀释液时，可降低稀释梯度倍数，从而得到更准确的LD50。 |
Q4：这个试剂盒能检测LDH的酶活吗？ |
A4：本产品通过LDH活性检测细胞毒性，不能检测如：LDH1, LDH2, LDH3的活性。 |
Q5：LDH本身的稳定性如何？ |
A5：文献报道，培养基中LDH活性的1天内降低＜5%（文献1），也可冷藏1周左右（文献2）。具体可因实验条件不同存在差异。 文献1： A. Wagner, A. Marc, JM. Engasser, A. Einsele, "The use of lactate dehydrogenase (LDH) release kinetics for the evaluation of death and growth of mammalian cells in perfusion reactors.", Biotechnol Bioeng. 1992; 39, (3), :320.. 文献2： M. Allen, P. Millett, E. Dawes, N. Rushton., "Lactate dehydrogenase activity as a rapid and sensitive test for the quantification of cell numbers in vitro.", Clin Mater. 1994; 16, (4), 189. |
Q6：Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST带LDH标准品吗？ |
A6：因为是检测细胞毒性使用，不带标准品。 |
Q7：试剂盒中的Stop solution添加后需立即检测吗？ |
A7：Stop solution添加后可避光保存3小时。 |
Q8：显色背景过高，有什么原因？ |
A8：考虑以下原因。 培养基中血清中的乳酸脱氢酶升高了背景。请用此培养基配制小于5%的血清或血清培养基。 如果培养基中含有待测物质具有强还原性，会与WST®显色。因此可预实验时单独检测判断。 （一般情况下，培养基如DMEM、RPMI、F-12，通常不含还原性物质 |
参考文献
1.Antitumor Effect by Hydroxyapatite Nanospheres: Activation of Mitochondria-Dependent Apoptosis and Ne…
ACS Nano,2018,12(8)7838-7854
2.Magnetic Nano-Clusters Armed with Responsive PD-1 Antibody
3.Synergistically Improved Adoptive T C….ACS Nano,2019, 13(2)1469-1478
4.Layer by layer cell coating technique using extracellular matrix facilitates rapid fabrication and fu….Biomaterials,2018,160,82-91
5.Oxidative stress–dependent phosphorylation activates ZNRF1 to induce neuronal/axonal degeneration
J.Cell Biol.，2015,211(4)881-896
6.Protein carbamylation exacerbates vascular calcification.Kidney International ,2018,94(1),72-90
7.In vitro cellular behaviors and toxicity assays of small-sized fluorescent silicon nanoparticles.Nanoscale,2017, 9(22),7602-7611
8.Pathological Endogenous a-Synuclein Accumulation in Oligodendrocyte Precursor Cells Potentially Induc…
Stem Cell Reports,2018,10(2),356-365
9.Biocompatible carbon nanotube fiber for implantable supercapacitors.Carbon,2017,122,162-167
10.Lower Expression of MicroRNA-155 Contributes to Dysfunction of Natural Killer Cells in Patients with ….Frontiers in Immunology，2017,8,1173
11.Melatonin Mediates Protective Effects against Kainic Acid-Induced Neuronal Death through Safeguarding….Frontiers in Immunology,2017,10,49
特点：
● 不与细胞内LDH反应，可直接检测（一步法）或取上清液检测（低损伤法）。
● 更适合Car-T、ADCC、CDC等效靶杀伤实验。
● Working Solution配制后，可稳定保存6个月以上。
● 试剂盒稳定性高，数据重复性好。
● 搭配CCK-8检测，细胞毒性双指标认证。