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生物试剂
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产品解说
产品概述
线粒体利用氧气合成ATP，从而产生细胞所需的能量，是重要的细胞器之一。线粒体活性低下和机能障碍与癌症、老化、阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性疾病密切相关。因此，线粒体膜电位（MMP）作为线粒体相关疾病的一个有希望的靶点已被广泛研究。
产品特点
解决传统试剂的三个问题
观察线粒体膜电位时，使用JC-1、TMRE、TMRM，但由于PFA不可固定、容易淬灭，数据的再现性等问题。MT-1 MitoMP Detection Kit是克服了这些问题的线粒体膜电位的检测试剂。
并且，通过本试剂盒中包含的Imaging Buffer，可以在抑制了荧光背景和对细胞的损伤的状态下进行观察。
①固定后也可检测
由于微小的细胞状态的变化，也会造成线粒体膜电位发生变化，所以取得数据的重现性需要特别注意。通用的线粒体膜电位检测试剂（JC-1、TMRE）如果对细胞进行固定处理的话会失去荧光，所以需要使用活细胞进行迅速的测定。MT-1即使进行染色后进行PFA固定操作，也能保持荧光，因此可以进行高重复性的实验。
与各种试剂的比较
| Features | Sensitivity | Fixation | Monitoring | Fluorescence change (upon loss of mitochondrial membrane potential) | Detection (ex/em) | |
Recomended for starting-up | ✓ | Color change from red to green | Green: 450-490 nm / 500-550 nm | |||
MT-1 | Recommended for more detailed analysis | ✓ (High) | ✓ | ✓ | Decrease in fluorescence intensity | 530-560 nm / 570-640 nm |
TMRE | Widely used | ✓ (High) | Decrease in fluorescence intensity | 530-560 nm / 570-640 nm |
实验例
1.通过去极化的实验例
通过线粒体去极化剂的cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP)处理HeLa细胞，用该试剂观察膜电位的变化。
mtSOX: Ex=545-555 nm, Em = 665-685 nm
常见问题Q&A
Q1:使用荧光显微镜检测时需要注意什么？ |
A1:请尽量减少激发光照射时间并提高检测灵敏度。 细胞长期暴露于激发光内可能导致细胞损伤和荧光染料降解，请优化检测时间。 |
Q2：MT-1检测后可以固定吗？ |
A2：应使用4%多聚甲醛（PFA）固定，且不能与（Triton X-100、NP-40等）一起使用，因为这可能导致染泄漏。 |
Q3：固定后可以对细胞染色吗？ |
A3：由于MT-1在线粒体中的积累取决于线粒体膜电位，因此固定后不适用于染色。 |
Q4：是否需要做阳性对照？ |
A4：作为阳性对照，可在技术手册中找到使用FCCP（羰基氰化物-对三氟甲氧基苯腙）的实验例。 |
Q5：优化染色条件时，应使用何种浓度的MT-1染料 |
A5：MT-1染料的浓度建议稀释1000倍。但在优化染色条件时，请参考以下内容。 <荧光强度弱> 请优化以下浓度：稀释500-1000倍。 <观察到非特异性吸附> 请优化以下浓度：稀释1000至2000倍。 |
Q6:我可以使用缓冲液来制备MT-1工作溶液吗？ |
A6:可以使用Hanks的HEPES和HBSS。也可以使用MEM、RPMI和含10%FBS的MEM制备。 |
Q7：添加MT-1工作液后，可以不清洗直接上机检测吗？ |
A7：染色后，无需清洗即可观察样品。但我们不建议在不清洗的情况下长期观察它们，因为它们可能具有细胞毒性。 我们建议去除上清液并用培养基替换。 |
Q8：MT-1染色后，是否可以用PBS代替HBSS来清洗？ |
A8：我们建议使用HBSS来减少细胞损伤。如果您没有HBSS，我们建议使用培养基来代替清洗。 |
参考文献
| No. | Sample | Instrument | Reference |
|---|---|---|---|
| 1 | STHdh Cells | Microscope | N. Okada, T. Yako, S. Nakamura, M. Shimazawa, H. Hara, "Reduced mitochondrial complex II activity enhances cell death via intracellular reactive oxygen species in STHdhQ111 striatal neurons Q1 with mutant huntingtin", J. Pharmacol. Sci., 2021, doi:10.1016/j.jphs.2021.09.001. |
| 2 | Panc-1 Cells | Microscope | N. Okuni, Y. Honma, T. Urano, K. Tamura, "Romidepsin and tamoxifen cooperatively induce senescence of pancreatic cancer cells through downregulation of FOXM1 expression and induction of reactive oxygen species/lipid peroxidation", Mol. Biol. Rep., 2022, doi:10.1007/s11033-022-07192-9. |
| 3 | BM Cells | Microscope | Y. Aoyagi, Y. Hayashi, Y. Harada, K. Choi, N. Matsumura, D. Sadato, Y. Maemoto, A. Ito, S. Yanagi, D. Starczynowski, H. Harada, "Mitochondrial Fragmentation Triggers Ineffective Hematopoiesis in Myelodysplastic Syndromes", Cancer Discovery, 2022, doi:10.1158/2159-8290.CD-21-0032. |
| 4 | Flies indirect flight muscle Cells | Microscope | N. Nozawa, M. Noguchi, K. Shinno, M. Tajima, S. Aizawa, T. Saito, A. Asada, T. Ishii, M. Ishizuka, K. Iijima and K. Ando, "5-Aminolevulinic acid and sodium ferrous citrate ameliorate muscle aging and extend healthspan in Drosophila", FEBS Open Bio, 2022, doi:10.1002/2211-5463.13338. |
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