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免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术
其原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来标记目的蛋白,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成的荧光标记物,再用这种荧光抗体或抗原作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原或抗体。利用荧光显微镜观察标本,荧光素受到激光的激发照射而发出明亮的荧光(红色或绿色),就可以看荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原就抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。
(1)细胞免疫荧光技术:先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞内相应抗原(抗体)。
(2)组织免疫荧光技术:先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查组织内相应抗原(抗体)。
根据荧光素标记位置,可分为直接法与间接法。直接法利用荧光素直接标记待测蛋白第一抗体,特应性高但灵敏度低,且每种抗体均需单独标记,成本相对较高;间接法标记与一抗相结合的二抗,由于与一抗结合的二抗分子往往不止一个,因此可大大提高灵敏度,且检测成本降低。
其原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来标记目的蛋白,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成的荧光标记物,再用这种荧光抗体或抗原作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原或抗体。利用荧光显微镜观察标本,荧光素受到激光的激发照射而发出明亮的荧光(红色或绿色),就可以看荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原就抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。
(1)细胞免疫荧光技术:先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞内相应抗原(抗体)。
(2)组织免疫荧光技术:先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查组织内相应抗原(抗体)。
根据荧光素标记位置,可分为直接法与间接法。直接法利用荧光素直接标记待测蛋白第一抗体,特应性高但灵敏度低,且每种抗体均需单独标记,成本相对较高;间接法标记与一抗相结合的二抗,由于与一抗结合的二抗分子往往不止一个,因此可大大提高灵敏度,且检测成本降低。