碧云天研发生产的BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) (BeyoClick™ HPG Protein Synthesis Kit by Western Blot)，也称BeyoClick™ HPG新生蛋白质检测试剂盒(WB法) (BeyoClick™ HPG Nascent Protein Assay Kit by Western Blot)，是一种基于蛋白合成过程中蛋氨酸(Methionine)类似物HPG(L-homopropargylglycine)的掺入，并通过随后的点击反应(Click reaction)使HPG被Biotin-azide所标记，从而通过Western blot实现简单、快速、高灵敏地检测新合成蛋白的试剂盒。

本试剂盒可以定量检测培养的活细胞中新生蛋白质的合成[1-2]。该检测过程不需要放射性同位素(如35S-methionine)和抗体，只需要简单的两步反应即可完成。新生蛋白质又称新生蛋白、新生成蛋白质、初生蛋白质或新合成蛋白。

HPG (L-homopropargylglycine)，中文名为L-高炔丙基甘氨酸，是一种蛋氨酸(Methionine)类似物，HPG可以在蛋白合成过程中替代蛋氨酸掺入到新合成的蛋白中。另一方面，HPG上的炔基能与生物素或荧光标记的小分子叠氮化物(如Biotin Azide、Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速高效，被称作点击反应(Click reaction)，其反应原理参见图1。通过点击反应，新合成的蛋白会被生物素或相应的荧光探针所标记，从而可以使用适当的检测方法检测到新合成蛋白。本试剂盒处理后，新合成的蛋白标记上Biotin Azide，经Western blot后，可用Streptavidin-HRP识别并检测。

图1.碧云天BeyoClick™系列蛋白合成检测试剂盒中的点击反应(Click reaction)原理图。生物素或相应的荧光探针等标记的叠氮化物(Labeled Azide)与掺入到细胞蛋白中的HPG，在铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，最终使细胞蛋白标记上荧光探针或其它探针。

本试剂盒反应简单、检测灵敏度高。本试剂盒基于简单高效的点击反应，无需特殊温度，只需少量的Biotin Azide即可非常有效地标记掺入到新合成蛋白质的HPG。

本试剂盒使用便捷、兼容性好。本试剂盒只需裂解细胞，就可与Biotin Azide发生点击反应，不会产生多余的附加产物。可以兼容后续的抗体孵育和质谱检测。

本试剂盒操作流程请参考图2。

图2.碧云天BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) (P1215)实验操作流程图。

本试剂盒检测HeLa细胞新合成蛋白的效果参见图3。

图3.碧云天BeyoClick™ HPG蛋白合成检测试剂盒(WB法) (P1215)检测HeLa细胞新合成蛋白的效果图。HPG孵育0.5小时后裂解细胞进行Western blot检测，无HPG组无条带(图A样品1)；HPG组有明显的条带(图A样品2)；而用蛋白合成抑制剂茴香霉素(Ansiomycin) (50μM)提前预处理0.5小时后，无明显条带，说明蛋白合成抑制后，HPG的掺入被显著抑制(图A样品3)。图B为电泳后考马斯亮蓝染色总蛋白结果，三组均可以观察到明显的条带。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本试剂盒小包装如果用于6孔板培养细胞的检测，可以检测50个样品，每个样品的反应体系为500μl的Click反应液；如果用于96孔板检测，可以检测500个样品，每个样品的检测体系为50μl的Click反应液；如果用于12孔、24孔或48孔板样品的检测，分别可以检测125、250和350个样品，每个样品推荐的Click反应液用量为200μl、100μl和70μl。大包装可检测样品的数量为小包装的4倍。