商家描述
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下列步骤以24孔板为例,所有试剂用量和体积均是按每孔计算。
1.贴壁细胞:转染前一日,每孔0.5-2.0x105个细胞接种于500μL含抗生素的培养基中,转染时细胞长至60%~80%融
合最佳。
2.转染复合物的制备
A、将Gencefe Super Trans 转染试剂放置于室温中,使用前轻轻混匀;
B、在无菌管中加入50 ul无血清培养基或 OPTI-MEM,并添加2ul转染试剂,用移液器轻轻混匀,室温静置5 min;
C、在另一无菌管中加入50 ul无血清培养基或OPTI-MEM,并添加2ul siRNA,用移液器轻轻混匀,室温静置5 min;
D、将 Gencefe Super Trans 培养基混合物滴加至siRNA 培养基混合物中,用移液器轻轻混匀,室温静置15~20 min
后,立即转染。
注:siRNA一般推荐20uM浓度保存,2ul总量是40pmol。
3.在每孔细胞中加入100ul转染复合物,轻轻摇匀。
1.贴壁细胞:转染前一日,每孔0.5-2.0x105个细胞接种于500μL含抗生素的培养基中,转染时细胞长至60%~80%融
合最佳。
2.转染复合物的制备
A、将Gencefe Super Trans 转染试剂放置于室温中,使用前轻轻混匀;
B、在无菌管中加入50 ul无血清培养基或 OPTI-MEM,并添加2ul转染试剂,用移液器轻轻混匀,室温静置5 min;
C、在另一无菌管中加入50 ul无血清培养基或OPTI-MEM,并添加2ul siRNA,用移液器轻轻混匀,室温静置5 min;
D、将 Gencefe Super Trans 培养基混合物滴加至siRNA 培养基混合物中,用移液器轻轻混匀,室温静置15~20 min
后,立即转染。
注:siRNA一般推荐20uM浓度保存,2ul总量是40pmol。
3.在每孔细胞中加入100ul转染复合物,轻轻摇匀。