碧云天的细胞表面蛋白生物素化和分离试剂盒(Agarose Resin)，即Cell Surface Protein Biotinylation and Isolation Kit (Agarose Resin)，也称为细胞表面蛋白分离试剂盒(Cell Surface Protein Isolation Kit)，是一种新型、高效的对哺乳动物等细胞表面蛋白进行生物素化标记，随后通过链霉亲和素琼脂糖树脂(Streptavidin Agarose Resin)分离纯化细胞表面蛋白的试剂盒。本试剂盒提供了带有二硫键的生物素标记试剂，可使用试剂盒提供的二硫苏糖醇(DTT)在洗脱的同时还原并断开生物素标记过程中引入的二硫键，从而释放不带生物素标记的结合蛋白，进而用于后续的Western blot (WB)和Mass Spectrometry (MS)分析以及进行蛋白结构和功能等方面的研究。

本产品与Thermo公司的Pierce™ Cell Surface Protein Biotinylation and Isolation Kit (A44390)、Pierce Cell Surface Protein Isolation Kit (89881)，以及Abcam公司的Cell Surface Protein Isolation Kit (ab206998)的原理、用途和使用方法基本一致。

生物素(Biotin)是一种天然存在的小分子，它的存在很多情况下不会影响大分子的生物学功能。生物素广泛应用于生物素-(链霉)亲和素系统(Biotin-(strept) avidin system)，同时生物素也是羧化酶的重要辅因子，存在于各种代谢途径中[1-2]。生物素与亲和素(Avidin)或链霉亲和素(Streptavidin)的结合有助于将目标分子(抗体、核苷酸、蛋白A等)与标记系统(酶、荧光探针等)连接起来。这种复合物可以用于多种检测体系，例如免疫沉淀、免疫组织化学、流式细胞分析、Southern和Northern等。

Biotin-SS-NHS-Sulfo是一种中等长度、胺反应活性的NHS酯生物素化试剂，全称为磺酸基-琥珀酰亚胺-双硫-生物素，间隔臂(Spacer arm length)即添加至靶标的总长度约为24.3Å，由7原子链延长的生物素戊酸基团组成，其间隔臂含有可被还原而断开的二硫键。经Biotin-SS-NHS-Sulfo标记的蛋白可在还原剂(如DTT等)作用下断开二硫键而去除生物素，而标记的蛋白只留下一个巯基；磺酸基可增加水溶性，避免了DMSO或DMF有机溶剂的使用，能使水溶液中的蛋白、抗体或任何含伯胺的其它生物分子实现简单高效的生物素化；中等长度的间隔臂极大增加了被修饰分子与生物素之间的长度，降低了生物素后续与亲和素或链霉亲和素结合的空间位阻，这样标记产物对于亲和素或链霉亲和素有更好的结合效果。Biotin-SS-NHS-Sulfo不具有膜通透性，因此可用于细胞表面标记。

本试剂盒提供了生物素标记试剂(Biotin-SS-NHS-Sulfo)、用于结合标记蛋白等生物分子的生物素标签的链霉亲和素琼脂糖树脂(Streptavidin Agarose Resin)、裂解液(Lysis Buffer)、洗涤液(Wash Buffer)以及洗脱液(Elution Buffer)等试剂。本试剂盒生物素化细胞表面蛋白并分离纯化的实验流程和原理，请参考图1。Biotin-SS-NHS-Sulfo标记细胞表面的蛋白后进行细胞裂解，裂解后的样品与Streptavidin Agarose Resin结合。洗涤去除未结合的组分后，使用含DTT的洗脱液进行洗脱，即可获得不含生物素标记的细胞表面蛋白，后续就可以通过Western、质谱分析、结构和功能研究等分析鉴定细胞表面蛋白。

图1.碧云天细胞表面蛋白生物素化和分离试剂盒(Agarose Resin) (P0661)工作原理示意图。

本试剂盒结合速度快、操作简单。本试剂盒提供的Streptavidin Agarose Resin可以快速结合生物素标记的蛋白，结合量高；提供裂解、洗涤和洗脱生物素标记蛋白所需的所有试剂，操作简单。

本试剂盒特异性强、洗脱效率高。本试剂盒提供的Streptavidin Agarose Resin可对生物素标记的蛋白快速进行高特异性分离纯化，并通过DTT洗脱液实现高效的非变性洗脱。

本试剂盒小包装如果每次用于4个培养面积为75cm2的培养瓶的细胞量，相当于每次约2个15cm培养皿、5-6个10cm培养皿或5个6孔板的细胞量(约3千万个细胞)，可进行8次细胞表面蛋白标记和分离实验；每次用于1个10cm细胞培养皿(约500-600万细胞)，可以进行40次细胞表面蛋白标记和分离实验。如果每次细胞用量更少，则可以进行更多次数的细胞表面蛋白标记和分离实验。

-20ºC保存，一年有效。4ºC保存，至少3个月有效。

Streptavidin Agarose Resin使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使琼脂糖凝胶混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性、琼脂糖凝胶破碎等。

建议设置阴性和阳性对照组，以排除Streptavidin Agarose Resin非特异性吸附的干扰。

并非细胞表面所有蛋白都能通过本试剂盒分离纯化。空间位阻、缺乏伯氨基团或细胞外暴露极少的序列会阻碍或干扰生物素标记。

Biotin-SS-NHS-Sulfo很容易受潮水解失活，保存时一定要注意保持干燥；每次使用时必须平衡至室温，才能打开盖子，以避免受潮。每次细胞标记实验推荐使用一支新的Biotin-SS-NHS-Sulfo，不建议溶解后保存使用。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4ºC或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) (P1005/P1006)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) (P1048/P1049)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) (P1010/P1011)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) (P1050/P1051)等。

高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对Streptavidin Agarose Resin与生物素化蛋白的结合有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。

DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。