碧云天的Phenyl Agarose 6FF (High Sub) (高取代度Phenyl琼脂糖凝胶)，也称Phenyl Agarose 6FF (HS)、高取代度苯基疏水琼脂糖凝胶、高配基密度苯基疏水琼脂糖凝胶、Phenyl强疏水层析介质、Phenyl强疏水层析填料、Phenyl强疏水层析基质、Phenyl强疏水层析凝胶，是由苯基(Phenyl)与高度交联、高流速(Fast Flow)的6%琼脂糖共价偶联(简称6FF)而成的一种强疏水性疏水层析介质，可快速、高效、灵敏、特异性地在高盐条件下与蛋白质结合，主要用于疏水性弱的蛋白、抗体、多肽和核酸的分离纯化。本Phenyl琼脂糖凝胶为高取代度(High Substitution, 简称High Sub)，即配基密度高。本产品可用于非装柱的离心式直接纯化，也同样可用于制备成预装柱以用于AKTA等设备中压或低压条件下纯化疏水性弱的蛋白、多肽或核酸。

疏水作用层析(Hydrophobic interaction chromatography, HIC)是一种基于分子表面疏水性差异来分离纯化生物分子的技术，其核心原理依赖于盐析效应。在高浓度盐溶液中，盐离子与水分子发生强烈相互作用，导致疏水分子周围的水合层被破坏，从而暴露疏水区域，并促进疏水性分子与介质的疏水配基之间发生结合。该方法广泛用于蛋白质和多肽的纯化[1]。疏水作用介质由两部分组成：①网状基质(Matrix)：即琼脂糖、纤维素和经表面修饰的人工合成聚合物如聚苯乙烯、聚丙烯酸甲酯等亲水基质；②固定在基质上的配基(Ligand)：该配基，也称疏水基团，常见的配基有烷基(如丁基、辛基)和芳香基，通过稳定的化学键如醚键、硫醚键偶联到琼脂糖微球上。当配基的密度一定时，烷基链长的增长可增强疏水性，提高蛋白结合容量。

疏水作用层析介质的选择主要依据目标蛋白等分子的疏水性强弱，在分离疏水性较弱的分子时宜选择疏水性强的层析介质，在分离疏水性强的分子时则选择疏水性弱的层析介质。疏水作用层析介质常见功能基团疏水性强弱为：苯基(Phenyl)>辛基(Octyl)>丁基(Butyl)。除功能基团的种类以外，基质的类型与功能基团的取代度也会影响样品分离效果。

碧云天提供的疏水层析填料主要有弱疏水层析填料Butyl Agarose 4FF (P2143)、中疏水层析填料Octyl Agarose 4FF (P2145)和强疏水层析填料Phenyl Agarose 6FF (High Sub) (P2147)，三种填料的比较和选择请参见下表。

本产品是以Phenyl作为功能基团、高度交联的琼脂糖为高分子基质的疏水层析介质。Phenyl是一种芳香族的疏水配基，基于盐析效应，苯基既可以与蛋白质表面疏水区域通过范德华力结合，又因苯环自身的共轭结构可与蛋白质通过π-π相互作用结合等，从而将这些疏水性较弱的蛋白质等留在柱子上，然后通过降低洗脱液中的盐浓度等方法，将吸附在柱子上的蛋白质按疏水性由弱到强依次洗脱下来，从而实现生物大分子的分离纯化。本产品采用高度交联的琼脂糖是以Beyorose™ 6FF为基质，该基质是高度交联的6%琼脂糖(Agarose)，与Sepharose 6 Fast Flow的性能基本一致。

Phenyl琼脂糖凝胶在生物医学领域内应用非常广泛，可通过疏水性差异选择性地纯化生物制药或生物工程下游的蛋白、多肽、抗体等；或在特定条件下(如高盐或疏水修饰多糖)，可用于分离细胞和植物中多糖物质，多用于分离中性、酸性和粘多糖等物质等；还可用于去除细菌、细胞裂解液中疏水杂质(如膜碎片、脂质或宿主蛋白)，从而辅助提升基因组DNA或质粒DNA的纯度。本产品可用于非装柱的离心式直接纯化，也可用于装柱后纯化。本产品用于非装柱的离心式直接纯化实验流程请参考图1。

图1.碧云天Phenyl Agarose 6FF (High Sub) (高取代度Phenyl琼脂糖凝胶) (P2147)用于非装柱离心式直接纯化的实验流程图。

本产品结合量容量高。与同类的很多产品相比，本产品具有非常高的结合容量，对复杂样品中疏水性弱的蛋白、多糖和核酸等生物分子可以快速进行分离纯化。每毫升Phenyl Agarose 6FF (High Sub)沉淀可结合约35mg BSA。

本产品特异性强。本产品可特异性地结合疏水性弱的蛋白、多肽、多糖和核酸等生物大分子等，获得的产物纯度高，可进一步用于Western、ELISA、质谱分析等一系列后续的分析测试。

本产品流速快，适用性广。本产品性能稳定，可以快流速操作，可适用于实验室规模制备和生物制药、生物工程的大工业化制备，也可对接常用的层析设备。

本产品保存在20%乙醇中，凝胶沉淀体积为总体积的50%，即例如10ml包装体积中含有5ml凝胶沉淀体积。

4ºC保存，两年有效。

本产品使用前须混合均匀，即颠倒若干次使琼脂糖凝胶混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免琼脂糖凝胶破碎。

在纯化时，建议设置阳性和阴性对照组。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并在非层析时应始终放置在4ºC或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) (P1005/P1006)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) (P1048/P1049)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) (P1010/P1011)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) (P1050/P1051)等。

温度对疏水层析的影响比较大，通常低温条件下疏水性较弱，因此在实验过程中应保持环境、缓冲液以及样品的温度一致才能保证疏水层析的可重复性。通常温度应控制在22-24ºC。

疏水作用介质纯化生物大分子是一种典型的高选择性技术，在任何特定的离子强度下，待分离物质的滞留情况差异都可能很大。因此，如果想最优化的使用疏水介质的选择性，可以使用相对较短的柱。通常建议柱床高度范围为3-15cm，这样既可以保证高流速，也可以避免反压过大。

如果离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。

高浓度的DTT、巯基乙醇等对本产品与目标分子的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。