特性

 仅用于连接粘性末端
 dsDNA 切刻修复

概述

T7 DNA 连接酶来源于 T7 噬菌体，它是一种 ATP 依赖型双链 DNA 连接酶，该酶可催化双链 DNA 相邻 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基基团之间形成磷酸二酯键。T7 DNA 连接酶可以有效地催化粘性末端和切刻的连接。与 T4 和 T3 DNA 连接酶不同，T7 DNA 连接酶不能有效地催化平末端连接。因此，在实验过程中，当平末端和粘性末端同时存在时，仅需粘性末端发生连接，T7 DNA 连接酶是理想的选择。

来源

重组 E. coli 质粒，含有 T7 DNA 连接酶编码基因。

反应条件

1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液

[66 mM Tris-HCl，1 mM ATP，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，7.5% PEG 6000 (pH 7.6 @ 25℃)]，25℃ 温育。

质保声明

T7 DNA 连接酶经过严格的质量控制检测，以确保最高的纯度和反应效率。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

单位定义

1 单位是指在 20 μl 总反应体系中，1 X T7 DNA 连接酶反应缓冲液条件下，25℃ 温育 30 分钟，能使 50% 的 100 ng 经 HindIII 消化的 λDNA 片段连接所需的酶量。

浓度

3,000,000 units/ml。

注意事项

ATP 是必需的辅助因子。

当某些实验不能用 PEG 6000 时，可使用 T4 DNA 连接酶缓冲液，但活性会降低 10 倍。切记反应时体系内一定要有终浓度为 1 mM 的 ATP。

65℃ 加热 10 分钟可使 T7 DNA 连接酶失活。如果反应缓冲液中含有 PEG，该酶不能加热失活，否则会抑制后续转化实验。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。