特性

 DNA 和 RNA 的去磷酸化

 克隆载体去磷酸化，防止载体自连

 测序或 SNP 分析前除去 PCR 反应中dNTP 和焦磷酸盐

 T4 PNK 标记 5´ DNA 末端前的去磷酸化

概述

快速去磷酸化试剂盒中的快速小牛肠碱性磷酸酶（CIP）是热敏重组 CIP。快速 CIP 非特异性的催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外，快速 CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸（NTPs 和 dNTPs）。快速 CIP 能去除DNA 和 RNA 末端的磷酸基团，其应用广泛。在克隆中，该酶对线性载体去磷酸化，防止自连。快速 CIP 10 分钟即可使 5´ 突出端、凹陷端和平末端去磷酸化。该酶还可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTPs，用于制备测序模板和 SNP 分析。

不像野生型 CIP，快速 CIP 可以热失活，80℃ 2 分钟即可完全不可逆的热失活，从而在连接和末端标记前没必要除去该酶。

快速去磷酸化试剂盒包括：

- CutSmart 缓冲液

- 快速小牛肠碱性磷酸酶（CIP）

质保声明

快速去磷酸化试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

贮存与使用

存储温度

-20°C

注意事项

1. 与大部分的磷酸酶一样，快速 CIP 的活性依赖于 Zn²⁺和 Mg²⁺。该酶在配方中，已经将锌原子结合到活性中心，因此，反应时无需添加额外的锌离子或其他辅助因子。

2. CIP 在 1X NEBuffer 1.1、2.1、3.1 和 NEBuffer 1、2、3、4中均有活性。

3. 快速 CIP 在一价盐离子存在时，其活性可被增强。

4. 金属螯合剂 (如 EDTA )、无机磷酸盐和磷酸盐类似物等可抑制快速 CIP 活性。

5. 还原剂(如 DTT、β-巯基乙醇)的存在可抑制快速 CIP 活性。

参考文献

1. Weissig, H. et al. (1993). Biochem. J. 290, 503-508.

2. Manes, T (1998). J. Biol. Chem.. 273, 23353-23360.