特性

 二代测序文库构建中连接单链 DNA 和腺苷化的 DNA 接头
 构建 small RNA 二代测序文库时，可在较高温度下连接预腺苷化的接头和 RNA

概述

5´ App DNA/RNA 热稳定连接酶来自嗜热碱甲烷杆菌（Methanobacterium thermoautotrophicum），是 RNA 连接酶催化亚基的赖氨酸点突变体。该酶连接时不需要 ATP，但需要 5´ 预腺苷化的接头才能将其连接到 RNA 或单链 DNA 的 3´ OH 末端。该酶也可催化 3´ 端被 2´ -O-甲基化的 RNA 和 5´ 预腺苷化接头的连接反应。连接反应的最适反应温度为 60-65℃。连接酶的点突变体不能使 RNA 或单链 DNA 的 5´ 端磷酸腺苷化，因此降低非特异性的串联和环化。

该酶能在 65℃ 反应，此温度下降低了 RNA 二级结构对连接反应的制约。

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 His 标签的 5´ AppDNA/RNA 连接酶基因。

反应条件

1X NEBuffer 1 [10 mM Bis-Tris-Propane-HCl (pH 7.0 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT]，65℃ 温育。

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、核酸外切酶、 RNase 和磷酸酶污染。

浓度

20 μM。

使用注意事项

建议连接单链 DNA 和预腺苷酸化接头时，使用含镁离子的 NEBuffer 1。

参考文献

有关该产品性质及应用的相关文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。

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反应条件

质保声明

浓度

使用注意事项

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