识别位点

Remove-iT PNGase F 水解糖肽/蛋白上所有类型的 N-糖链 [x = H 或者寡糖]。

特性

 从糖蛋白上切除 N-连接糖链

 更多详细结构特异性请翻阅目录 257页

概述

Remove-iT PNGase F 是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：最内侧的 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间（1）。Remove-iT PNGase F 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。

来源

从脑膜败血性杆菌（Flavobacterium meningo-septicum）中提取纯化。

反应条件

将糖蛋白于 1X DTT（40 mM）中 55℃ 温育 10 分钟使其变性。1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中 37℃ 温育 1 小时。热失活：75℃ 10 分钟。

随酶提供的试剂

10X DTT

10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液

分子量

41,000 daltons。

质量保证

无糖苷外切酶污染，无糖苷内切酶F1、F2 或 F3 活性，无蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 5 μg DTT 变性的 RNase B 中移除超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。

浓度

225,000 units/ml。

注意事项

当使用包含 SDS 和 DTT 的 NEB 糖蛋白变性缓冲液对 RNase B 进行变性时，需要 500,000U/ml 高浓度 Remove-iT PNGase F。

当 Remove-iT PNGase F 在变性条件下使用时，需要在反应混合物中加入 NP-40，因为 SDS 抑制Remove-iT PNGase F 活性。目前还不清楚非离子变性剂抵消 SDS 对 Remove-iT PNGase F 抑制的机理。

去糖基化反应完成后，可以用几丁质磁珠去除Remove-iT PNGase F，且几丁质磁珠的用量与去除Remove-iT PNGase F 成正比线性关系。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。