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生物试剂
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概述
RNase B是一种高甘露糖蛋白，可作为糖苷内切酶切割N-连接糖链的阳性对照。RNase B有一个N-连接糖基化位点，可以用于SDS-PAGE凝胶电泳分析。
来源
牛胰
贮存溶液
Milli-Q™水
分子量
17,000 Da（去糖基后13,683 Da）
RNase B去糖操作步骤
1. 10 μl 反应体系中，加入2 μl 的RNase B、1μl 10X糖蛋白变性缓冲液和 5 μl H2O。
2. 于100°C煮沸 10分钟。
3. 加入1 μl 10X GlycoBuffer 2反应缓冲液和 1 μl 10% NP-40。
4. 加入1 μl糖苷内切酶。
5. 37°C温育 1小时。
6. 将反应产物上样于10-20%的 SDS-PAGE胶。
注意事项
250 μg足够用于约20次反应。
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参考文献
1. Plummer, T.H. and Hirs, C. (1964). J. Biol. Chem. 239, 2530-2538.
2. Plummer, T.H. Jr., Tarentino, A. and Maley, F. (1968). J. Biochem. (Tokyo). 243, 5158-5164.
3. Liang, C.-J. Yamashita, K. and Kobata, A. (1980). J. Biochem (Tokyo). 88, 51-58.