1. 简介
Taq DNA 聚合酶是一种热稳定酶,在适合的体系,特定引物和 dNTPs 存在的情况下,可以根据已解链的模板合成 DNA。我们的产品 Taq DNA Polymerase 是一种重组酶,分子量约为94kd。
Taq DNA 聚合酶具有 5'→3'DNA 聚合酶和微弱的 5'→3'核酸外切酶的能力,但没有 3'→5'外切酶的能力,这意味着在 3'末端会出现 dA 突出。利用该特征,可以将 dA 添加到平端的 3'末端,用于 TA 克隆。在 PCR 反应中,对于大多数模板,Taq DNA 聚合酶的延伸速度通常为 1kb/ min,对于高复杂性的基因,它可能需要 1-2kb / min。
该 Master Mix 含有染料,这意味着它可以在扩增后直接进行电泳,无需添加上样缓冲液。
如果模板具有更多的二级结构,更高的 GC 含量或是长度超过 5 kb,您可能需要更多优化。
2. 配置 PCR 反应体系
如下表配置您的 PCR 反应体系,或使用您自己的体系和条件。
完全解冻 Master Mix 和各个组分,在使用前混合并短暂离心。我们建议在冰上配置所有反
应组分。
Compent |
20μl reaction |
50μl reaction |
Final concentration |
ddH2O |
Add to 20μl |
Add to 50μl |
/ |
10μM forward primer |
2μl |
0.4μM |
|
10μM reverse primer |
0.8μl |
2μl |
0.4μM |
Template DNA |
varies |
varies |
1-500ng |
2X Taq PCR Master Mix(with dye) |
10μl |
25μl |
1X |
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