产品介绍
PAGE快速凝聚试剂盒适用于聚丙烯酰胺凝胶的快速制备,制胶快速安全,省时省力。本产品具备其它同类新品无需加入TEMED,制胶较传统凝胶试剂盒更迅速高效等共同优点,但又更具优势,如:凝胶速度更快,新型促凝剂更加稳定、高效、便捷,变性、非变性凝胶通用,western结果更清晰等。与固定分离胶浓度类产品相比又各具特点,本试剂盒的通用性更好,既可按传统方法制胶,也可根据需要变为所需分离胶浓度的等体积比配制,无需够买不同浓度试剂盒产品,节省空间,更加经济。
产品内容
保存条件:
2-8℃,有效期1年
产品特点
1.制胶便捷,凝胶迅速
采用稳定高效的新型液体促凝剂,凝胶速度优于市面其它凝胶试剂盒,10-15min即可配制一块凝胶;
2.避免异味,减少刺激
无需使用TEMED,远离恶臭气味困扰;
3.比例随心,通用性好
下层胶浓度可调设计,变性、非变性凝胶均适用,无需因为实验要求变化重新购买它款凝胶试剂盒;
4.不调电压,条带清晰
150-300v电泳效率更高,不必因上、下层胶而改变电压,小分子量蛋白条带更清晰。
使用方法
本试剂盒制胶方法灵活,可按照传统方法配制,也可按固定浓度等体积比方法配制。按固定浓度等体积比方法配制即为目前市售试剂盒固定下层胶丙烯酰胺浓度,缓冲液与Acr-Bis溶液等体积混合的配制方式。配胶前请确认制胶板洁净、干燥且不漏液体。确认后,将配胶板按要求装入夹具中,根据需要选择制胶方法。
一、传统制胶法
1、根据下表所列配制下层胶溶液。为便于配制,超过1 mL的液体移取,推荐使用5 mL移液器。
注:(1)下层胶溶液总体积为5 mL;(2)如需其它体积下层胶溶液,可按下式计算各组份体积:
所需组份体积 mL = 所需下层胶总体积 mL ÷ 5 mL × 表中对应组份体积 mL。
2、将配好的下层胶溶液酌量灌入制胶板中,再加入异丙醇或水封闭。下层胶凝固后,倾倒掉封闭用的异丙醇或水,再加入配好的上层胶溶液至板口(如有气泡可轻弹盖板使气泡上浮),插入样品梳凝固后即可使用。上层胶配制如下表(总体积2 mL):
注:如需其它体积,可按下式计算: 所需组份体积 mL = 所需上层胶总体积 mL ÷ 2 mL × 表中对应组份体积 mL。
3、也可选择不加异丙醇或水封闭,则配胶步骤变为加入配好的下层胶溶液,左右轻晃配胶板使下层胶液面尽量平整,灌入配好的的上层胶溶液,插入样品梳待凝固后使用。与包含封闭步骤配胶方法相比,该方法无需等待下层胶凝固,配胶更便捷,但也有对配胶板洁净度要求高,上、下层胶界面平整度略差,两条边道无法使用等缺点,请酌情使用。
二、固定浓度等体积比制胶
1、下层胶缓冲预混液配制 取25 mL下层胶缓冲液,加入25 mL纯水混匀,即为下层胶缓冲预混液。
2、下层胶Acr-Bis预混液配制 根据所需下层胶使用浓度,按下表取水和30%Acr-Bis混匀后装入棕色瓶备用。
3、上层胶缓冲预混液配制 取10 mL上层胶缓冲液,加入10 mL纯水混匀,即为上层胶缓冲预混液。
4、上层胶Acr-Bis预混液配制 按下表取水和30%Acr-Bis混匀后装入棕色瓶备用。
注:上述所有预混液需2-8℃保存,约可配制20块0.75mm的mini胶。
5、下层胶配制 各取2.5 mL下层胶缓冲预混液与下层胶Acr-Bis预混液,加入0.025 mL凝胶促凝剂轻轻摇混数秒后,灌入配胶板中。加入异丙醇或水封闭,待凝固后弃去异丙醇或水(封闭步骤可选)。
6、上层胶配制 各取1 mL上层胶缓冲预混液与上层胶Acr-Bis预混液,加入0.035 mL凝胶促凝剂轻轻摇混数秒后,灌入配胶板中,插入样品梳,带凝固后即可使用。
注意事项
1、长期存放可能出现凝胶过缓问题,可通过额外加入TEMED解决;2、凝胶促凝剂4个月以内用完可无需分装保存,长期保存请分装后放于-20℃;3、凝胶时间受室温影响,推荐的凝胶促凝剂用量可在25℃下,5min内完成凝胶。如需更快或更慢凝胶,可适量增减凝胶促凝剂用量;4、配制胶溶液时,轻摇数下即可,不要猛烈摇晃,以防产生大量气泡;5、无需改变电压,150v-300v电压下电泳,可在30-55min完成电泳(随下层胶浓度不同有差异),300v电泳时可在外槽放入冰袋;6、因蛋白酸碱性不同,非变性电泳有差异,请根据具体情况选择;7、丙烯酰胺有神经毒性,操作时请做好防护;8、本品仅限科研使用。