保存条件

MIsZOLl试剂应在2-8℃避光条件下存放。

产品概述

MIsZOL是广谱型总 RNA 提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、 植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总 RNA。该方法对少量的组织（50-100 mg）和细胞（5×106）以及大量的组织（≥1 g）和细胞（>107）均有较好的分离效果。

MIsZOL 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种 RNA 的析出。该产品可在一个小时之内完成样品 RNA 的提取，提取 的总 RNA 完整性好，无蛋白和基因组 DNA 污染，可用于各种分子生物学常规实验，如 RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、 Dot Blot、体外翻译等下游实验。

不同样本提取 RNA 的大致产量与纯度如下：

自备材料

氯仿、异丙醇（新开封或提取 RNA 专用）、75%乙醇（用 DEPC 处理过的水配制）、RNase Free H2O 或者 DEPC 处理过的水。

注意事项

请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项

◇ 样品用MIsZOL 匀浆后，置于-70℃下可放置一个月以上。

◇ 若下游实验对 DNA 非常敏感，建议用 RNase Free DNase I 对 RNA 进行处理。

◇ 当抽提的 RNA 用 TE 稀释时其 A260/A280 比值≥1.8。注意如果是 1%普通琼脂糖凝胶电泳，28S 的位置大约在 2 kb，18S 大约在 1 kb 的位置，不同浓度的凝胶位置变化较大。

◇ 用 MIsZOL 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩，避免接触皮肤和衣服；在化学通风橱内完成操作，避免呼吸道吸入。如无特殊说明，所有的操作应该在 15-25℃的室温条件下。

使用方案

1. 样本处理：

植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在SparkZol中迅速研磨，每50-100 mg组织加入1 mL MIsZOL，混匀。

▲样品体积一般不要超过MIsZOL体积的10%。

动物组织：取新鲜或-70℃冻存动物组织，尽量剪碎，每30-100 mg组织加入1 mL SparkZol，匀浆仪进行匀浆处理；或在 液氮中研磨后加入1 mL SparkZol混匀。

▲样品体积一般不要超过MIsZOL体积的10%。

单层培养细胞：尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1 mL的MIsZOL覆盖并反复吹打裂解细胞。 MIsZOL的加入量应根据培养板的面积计算，而不是依据细胞的数量，每10 cm2加1 mL。当MIsZOL量不足时可导致基因

组DNA残留。

▲贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，但细胞膜实际已经完全破裂开，并已释放出全部RNA。

细胞悬液：离心收集细胞。在MIsZOL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。每5-10×106的动物细胞、植物、酵母菌细胞

或每1×107细菌加1 mL的MIsZOL。在加入MIsZOL前应避免洗涤细胞，降低mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细 菌可能需要使用匀浆器。

血液：推荐使用本公司的MIsZOL Reagent LS（货号：MI00618），全血或者液体样品专用的MIsZOL Reagent。

2. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5 min以使核蛋白体完全解离。

3. 可选步骤：4℃ 12,000 rpm（13,400×g）离心10 min，取上清。

▲如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA，

上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时，上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。

4. 每1 mL MIsZOL加0.2 mL氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15 s并将其在室温下放置2-3 min。

5. 在4℃ 12,000 rpm（13,400×g）的离心力高速冷冻离心10-15 min。离心后混合物分成三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA存在于水样层。水样层的容量大约为所加MIsZOL容量的50-60%。

6. 将水样层转移到干净的RNase Free离心管中，加入等体积异丙醇。颠倒混匀后室温放置10 min。

▲RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。