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本试剂盒用于检测细胞凋亡早期的发生,其中Annexin V为胞内蛋白膜联蛋白家族成员,以钙离子依赖的方式选择性与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。
PS正常分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把PS外翻到细胞膜外侧。用带有FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,就可以通过流式细胞仪或荧光显微镜检测到PS的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,在嵌入DNA后释放红色荧光。PI不能穿透完整的细胞膜,但可以穿透坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC和PI结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。
FITC最大吸收波长为490nm,发射波长为525nm,PI-DNA复合物的最大吸收和发射波长分别为535nm和615nm。