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生物试剂
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商家描述
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| 产品名称 : | PH1735 | IPTG Solution (50mg/ml) |
| 产品品牌 : | 飞净 PHYGENE |
产品简介
配置方法
50mg/ml IPTG 5 ml：取250 mg IPTG，溶于5 ml无菌水中，过滤除菌后-20℃贮存。
20mg/ml X-Gal 5 ml：取100 mg X-gal，溶于5 ml 二甲基甲酰胺（DMF），棕色瓶中-20℃ 贮存。此试剂无需灭菌。
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏阅读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃倒置培养12-16hr后，含有插入片段重组质粒的细菌形成白色菌落，而没有插入片段的质粒细菌形成蓝色菌落。
运输与存储：冰袋运输，-20℃保存，有效期至少12个月。
配置方法
50mg/ml IPTG 5 ml：取250 mg IPTG，溶于5 ml无菌水中，过滤除菌后-20℃贮存。
20mg/ml X-Gal 5 ml：取100 mg X-gal，溶于5 ml 二甲基甲酰胺（DMF），棕色瓶中-20℃ 贮存。此试剂无需灭菌。