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糖酵解和氧化磷酸化是细胞内两条主要的能量生产途径。大多数细
胞具有在这两条途径之间转换的能力,从而适应环境的改变。细胞
中的葡萄糖 (Glucose) 转变成丙酮酸 (称之为糖酵解),随后在细
胞质中转变成乳酸,或在线粒体中转变成 CO 2 和水。葡萄糖转变成
丙酮酸和后来的乳酸,导致质子的净生产并排到细胞外培养基中
(第 7 页图 2)。质子的排出导致细胞周围的培养基酸化。
XF 仪器直接测量酸化速率,以 ECAR 来表示这一指标。以下是实
验流程。首先,细胞在无葡萄糖和丙酮酸钠的糖酵解压力测试检测
液中孵育,并测量 ECAR。第一次注射的是饱和浓度的葡萄糖。细
胞利用加入的葡萄糖并通过糖酵解通路将其分解成丙酮酸,产生
ATP、 NADH、水和质子。
质子排出到周围溶液中引起 ECAR 快速增加。这种葡萄糖诱导的反
应被称为基础条件下的糖酵解速率。第二次注射的是寡霉素
(Oligomycin),一种 ATP 合酶的抑制剂。寡霉素抑制线粒体 ATP 的
产生,将能量产生途径转换到糖酵解,随后 ECAR 增加显示细胞最
大的糖酵解能力。
最后注射 2- 脱氧葡萄糖 (2-deoxy-glucose, 2-DG),一种葡萄糖类似
物,通过竞争性结合葡萄糖己糖激酶,糖酵解通路的第一个酶,抑
制糖酵解。因此导致的 ECAR 减少证实实验中产生的 ECAR 来源于
糖酵解。糖酵解能力和糖酵解速率的差值定义为糖酵解储备。葡萄
糖注射之前的 ECAR,被称为非糖酵解的酸化;是细胞除糖酵解之
外的过程引起的。
胞具有在这两条途径之间转换的能力,从而适应环境的改变。细胞
中的葡萄糖 (Glucose) 转变成丙酮酸 (称之为糖酵解),随后在细
胞质中转变成乳酸,或在线粒体中转变成 CO 2 和水。葡萄糖转变成
丙酮酸和后来的乳酸,导致质子的净生产并排到细胞外培养基中
(第 7 页图 2)。质子的排出导致细胞周围的培养基酸化。
XF 仪器直接测量酸化速率,以 ECAR 来表示这一指标。以下是实
验流程。首先,细胞在无葡萄糖和丙酮酸钠的糖酵解压力测试检测
液中孵育,并测量 ECAR。第一次注射的是饱和浓度的葡萄糖。细
胞利用加入的葡萄糖并通过糖酵解通路将其分解成丙酮酸,产生
ATP、 NADH、水和质子。
质子排出到周围溶液中引起 ECAR 快速增加。这种葡萄糖诱导的反
应被称为基础条件下的糖酵解速率。第二次注射的是寡霉素
(Oligomycin),一种 ATP 合酶的抑制剂。寡霉素抑制线粒体 ATP 的
产生,将能量产生途径转换到糖酵解,随后 ECAR 增加显示细胞最
大的糖酵解能力。
最后注射 2- 脱氧葡萄糖 (2-deoxy-glucose, 2-DG),一种葡萄糖类似
物,通过竞争性结合葡萄糖己糖激酶,糖酵解通路的第一个酶,抑
制糖酵解。因此导致的 ECAR 减少证实实验中产生的 ECAR 来源于
糖酵解。糖酵解能力和糖酵解速率的差值定义为糖酵解储备。葡萄
糖注射之前的 ECAR,被称为非糖酵解的酸化;是细胞除糖酵解之
外的过程引起的。