磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面。

Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。汇宇诚将Annexin V进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的Annexin V作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，

PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此采用Annexin V与PI双染的方法，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

所需实验器材：

微量移液器；PBS；不含EDTA的胰酶消化液；低速离心机；流式细胞仪

注意事项：

1. 此试剂盒仅供研究使用。

2. 微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用。

3. Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。

4. Annexin V-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠（NaN3）, 操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。

5. 本试剂盒用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1x106。

6. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

7. Annixin V检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测。对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，

会造成较高的假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测，可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。尽管目前，

包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞。我不推荐用该方法检测。因为其重复性较差，且需要操作时非常小心。

8. 消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，最终导致染色失败。

9. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。