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Calcein AM是在Calcein(钙黄绿素)的基础上,引入了一个乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,AM基团不仅掩盖了Calcein螯合钙的分子部分且增强了其疏水性,因此可以使Calcein AM轻易穿透活细胞膜。当Calcein AM进入细胞后,能够被细胞内源性酯酶剪切为Calcein。失去AM基团后,Calcein不能轻易通过细胞膜,从而被滞留在细胞内;此外螯合钙的分子部分被暴露出来,Calcein探针和细胞内钙离子结合后,能够发出强绿色荧光。而死细胞缺乏酯酶,不能使Calcein AM被水解成能Calcein,故无法标记死细胞。PI(碘化丙啶)能够嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光,但是不能直接染色活细胞的细胞膜,只能染色细胞膜被破坏的死细胞。因此将Calcein-AM与PI联合使用,可对活细胞和死细胞进行染色标记。
本试剂盒基于上述原理,且经过本司优化和调试,通过Calcein-AM标记活细胞,PI标记死细胞来进行双重染色标记,从而可以对活细胞和死细胞水平分析。