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生物试剂
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商家描述
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产品详情
产品名称总蛋白提取试剂盒
应用详情
悬浮细胞蛋白提取：
1. 提取液制备：每 5 00ul 冷的 总蛋白提取液中加入 2 ul 蛋白酶抑制剂混合物 和 2 ul 磷酸 酶抑制剂混合物
混匀后置冰上备用 。
2. 取 5 × 10 6 个细胞 ① ，在 4 2500g 条件下离心 5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞 。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5 × 10 6 1 × 10 7 个细胞（大约 50mg 细胞， 50ul 细胞压积）中 加入 5 00ul 冷的 总蛋白提取液 ，吹打混
匀后， 在 4 条件下 振荡 20 分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
5. 在 4 140 00 g 条件下离心 15 分钟 。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量 ② 后分装于 80 冰箱保存备用或直接用于下游实验 ③ 。
注：①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
②建议用 BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品蛋白样品－－8080℃存放℃存放一年没有问题。一年没有问题。注意注意不要被蛋不要被蛋白酶水解掉白酶水解掉，，不要被细菌不要被细菌污染污染。。