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不同血清型的AAV组织趋向性
AAV1:肌肉,心脏,骨骼肌,神经系统;AAV2:神经系统
AAV5:肺,眼,神经系统
AAV6:肺,心脏,血液细胞,免疫细胞
AAV8:肝,肌肉,眼,神经系统
AAV9:肺,肝,肌肉,心脏,神经系统
DJ,DJ8:细胞体外感染
PHP.eB、PHP.B、PHP.S:神经跨血脑屏障
Retro:神经逆行示踪
AAV病毒生产的简要流程
第一步:把外源基因克隆进入合适的病毒载体;第二步:重组表达质粒同pHelper和pAAV-RC共转染AAV-293细胞。转染2到3天后重组AAV在细胞中组装完成;
第三步:从被感染AAV-293细胞中收集AAV病毒颗粒。一般AAV颗粒会富集在包装细胞中,所以收集细胞而后裂解释放AAV颗粒到上清中可以回收大部分的AAV病毒颗粒
第四步:浓缩并纯化第三步的病毒上清液。原上清液里面包含了许多细胞蛋白分子和碎片,动物实验都需要纯化后的病毒才能够进行,否则会达不到所需剂量并引起副作用;
第五步:用定量PCR方法测定所得病毒的滴度。这种方法可以得到被包装到颗粒中的AAV基因组的物理滴度值。