BL21(DE3) pLysS Chemically Competent Cell

l 产品规格

货号：KTSM111L

规格：100 μL/支

pUC19(control vector，100 pg/μL）：5μL

保存条件：-80℃   

有效期：6个月

运输：干冰运输

l 基因型

F^- ompT hsdS(r_B^-m_B^-) gal dcm(DE3)pLysS Cam^R

l 产品说明

BL21(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7 溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区(DE3 区含有T7噬菌体 RNA 聚合酶)。BL21(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率 >10⁸ cfu/μg DNA。

l 操作方法

热激转化法

1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞，冰浴5 min, 融化后吸取100 uL，加入目的质粒（连接产物）, 轻轻混匀，冰浴25分钟。

2. 42℃ 水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动。

3. 向离心管中加入700 μL 2YT 或LB无菌培养基（不含抗生素），37℃、200 rpm/min、60分钟培养复苏。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34μg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的 2YT 或LB 培养基上。