Origami B(DE3) Chemically Competent Cell

l 产品规格

货号：KTSM114L

规格：100 μL/支

pUC19(control vector，100 pg/μL）：5μL

保存条件：-80℃   

有效期：6个月

运输：干冰运输

l 基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R)

l 产品说明

Origami B(DE3)菌株包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3区(DE3 区含有T7 噬菌体 RNA 聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶，可用于pET 系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。OrigamiB(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率 >10⁸ cfu/μg DNA。

l 操作方法

1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞，冰浴5 min, 融化后吸取100 uL，加入目的质粒（连接产物）, 轻轻混匀，冰浴25分钟。

2. 42℃ 水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，该过程不要摇动。

3. 向离心管中加入700 μL 2YT 或LB无菌培养基（不含抗生素），37℃、200 rpm/min、60分钟培养复苏。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或LB 培养基上。

5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。