
本Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) 即快流速蛋白G琼脂糖凝胶,也称为Protein G Resin (蛋白G亲和层析树脂),主要用于抗体的纯化,也可以用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。
对于免疫沉淀或免疫共沉淀,也可以选用碧云天的P2009 Protein G Agarose (Fast Flow, 进口分装)或P2053 Protein G Agarose (Fast Flow, for IP)。
Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白,分子量为42kDa;Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似,能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合,结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区,但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合,而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时,两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合,可用于抗体的纯化或免疫沉淀。
Protein G Agarose适合于纯化human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3,rat IgG1、IgG2a、IgG2b、 IgG2c,以及rabbit、goat多克隆抗体。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose产品与人、小鼠、大鼠常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况表。
Species | Ig | Protein A | Protein G | A+G |
Human | IgG1 | ++++ | ++++ | ++++ |
IgG2 | ++++ | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | ++++ | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | ++++ | |
IgA | ++ | - | ++ | |
IgD | ++ | - | ++ | |
IgE | ++ | - | ++ | |
IgM | ++ | - | ++ | |
Mouse | IgG1 | + | ++++ | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | +++ | |
IgM | +/- | - | +/- | |
Rat | IgG1 | - | + | + |
IgG2a | - | ++++ | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | ++ | |
IgG2c | + | ++ | ++ | |
IgM | +/- | - | +/- |
Total Ig | Protein A | Protein G | A+G |
Human | ++++ | ++++ | ++++ |
Mouse | +++ | +++ | +++ |
Rat | +/- | ++ | ++ |
Rabbit | ++++ | +++ | ++++ |
Goat | - | ++ | ++ |
Chicken | - | + | + |
Cow | ++ | ++++ | ++++ |
Guinea Pig | ++++ | ++ | ++++ |
Hamster | + | ++ | ++ |
Horse | ++ | ++++ | ++++ |
Pig | +++ | +++ | +++ |
Sheep | +/- | ++ | ++ |
++++: Strong Binding |
++~+++: Medium Binding |
+: Weak Binding |
+/-: Weak or No Binding |
-: No Binding |
本产品中的重组Protein G可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合,分子量为22kDa。该重组Protein G通过改造,仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列,去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列(如白蛋白结合位点),从而可以有效减少非特异性结合。每个Protein G分子可以结合3个IgG。
本产品中的Protein G共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上。每毫升Protein G agarose beads (沉淀物)中共偶联有约2mg的重组Protein G。每毫升Protein G agarose beads (沉淀物)可以结合超过20mg human IgG。本产品中agarose beads的平均直径为90μm,抗体纯化时的推荐线性流速为50-300cm/h,耐压指数最高为0.3MPa。本产品具体参数如下表:
指标 | 具体参数 |
规格 | 多种包装规格,25%悬浊液 |
琼脂糖 | 刚性交联的4%琼脂糖 |
琼脂糖平均粒径 | ~90μm |
配基 | 重组Protein G |
配基分子量 | 22kDa |
配基的IgG结合位点 | 3 |
配基的等电点(PI) | 4.69 |
配基结合量 | ~2mg Protein G/ml Protein G agarose beads (沉淀物) |
动态载量 |
~20mg hIgG/ml Protein G agarose beads (沉淀物) (TR=4min, hIgG 5mg/ml, 300cm/h线性流速) |
最高压力 | ~0.3MPa |
最高流速 | ~1200cm/h |
推荐流速 | 50-300cm/h |
储存 | TBS (含防腐剂),4℃保存 |
本产品配制在可以直接用于抗体纯化和免疫沉淀的适当溶液中,每毫升中共含有0.25ml agarose beads (沉淀物)。 本产品标注的体积为悬浊液总体积。