
本Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用)即快流速蛋白A琼脂糖凝胶,也称为Protein A Resin (蛋白A亲和层析树脂),主要用于抗体的纯化,也可以用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。本Protein A Agarose具有耐碱特性,可耐受0.1-0.5M的NaOH。
对于免疫沉淀或免疫共沉淀,也可以选用碧云天的P2006 Protein A Agarose (Fast Flow, 进口分装)或P2051 Protein A Agarose (Fast Flow, for IP)。
Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白,分子量为42kDa;Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似,能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合,结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区,但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合,而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时,两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合,可用于抗体的纯化或免疫沉淀。
Protein A Agarose适合于纯化human IgG1、IgG2、IgG4,mouse IgG2a、IgG2b及rabbit IgG等。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose产品与人、小鼠、大鼠常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况表。
Species | Ig | Protein A | Protein G | A+G |
Human | IgG1 | ++++ | ++++ | ++++ |
IgG2 | ++++ | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | ++++ | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | ++++ | |
IgA | ++ | - | ++ | |
IgD | ++ | - | ++ | |
IgE | ++ | - | ++ | |
IgM | ++ | - | ++ | |
Mouse | IgG1 | + | ++++ | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | +++ | |
IgM | +/- | - | +/- | |
Rat | IgG1 | - | + | + |
IgG2a | - | ++++ | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | ++ | |
IgG2c | + | ++ | ++ | |
IgM | +/- | - | +/- |
Total Ig | Protein A | Protein G | A+G |
Human | ++++ | ++++ | ++++ |
Mouse | +++ | +++ | +++ |
Rat | +/- | ++ | ++ |
Rabbit | ++++ | +++ | ++++ |
Goat | - | ++ | ++ |
Chicken | - | + | + |
Cow | ++ | ++++ | ++++ |
Guinea Pig | ++++ | ++ | ++++ |
Hamster | + | ++ | ++ |
Horse | ++ | ++++ | ++++ |
Pig | +++ | +++ | +++ |
Sheep | +/- | ++ | ++ |
++++: Strong Binding |
++~+++: Medium Binding |
+: Weak Binding |
+/-: Weak or No Binding |
-: No Binding |
本产品中的重组Protein A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合,分子量为14kDa。该重组Protein A经过基因工程技术的改造,使其成为耐碱结构域,从而实现Protein A的耐碱特性,并仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列,去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列,从而可以有效减少非特异性结合。每个Protein A分子可以结合2个IgG分子。
本产品有如下特点:超高IgG载量和优异的稳定性,每毫升Protein A agarose beads (沉淀物)可以结合超过50mg human IgG,在不同的保留时间和流速下具有良好的动态载量表现;杰出的耐碱性能和超高可重复利用度,以0.1M NaOH进行200次在位清洗后,载量无明显降低,以0.5M NaOH进行100次在位清洗后,仍保留80%载量;良好的耐压性能,使用刚性交联的4%琼脂糖基质,耐压指数最高达0.3MPa;超低配基脱落,配基脱落值小于10ng/mg IgG,降低了下游纯化过程中可能由于配基脱落造成的污染。本产品具体参数如下表:
指标 | 具体参数 |
规格 | 多种包装规格,25%悬浊液 |
琼脂糖 | 刚性交联的4%琼脂糖 |
琼脂糖平均粒径 | ~90μm |
配基 | 耐碱重组Protein A |
动态载量 |
~50mg hIgG/ml Protein A agarose beads (沉淀物) (TR=4min, hIgG 5mg/ml, 300cm/h线性流速) |
配基脱落值 | <10ng/mg IgG (ELISA) |
最高压力 | ~0.3MPa |
最高流速 | ~1200cm/h |
推荐流速 | 50-300cm/h |
化学稳定性 | 在常用缓冲液中保持稳定 |
工作pH范围 | 3-12 |
在位清洗 | 0.1-0.5M NaOH |
化学兼容性 |
Detergents: 1% Triton X-100, 1% NP-40, 0.1% SDS; Reductants: 2mM β-mercaptoethanol; Chelates: 20mM EDTA; Others: 1mM PMSF, 5% glycerol |
储存 | TBS (含防腐剂),4℃保存 |
本产品配制在可以直接用于抗体纯化和免疫沉淀的适当溶液中,每毫升中共含有0.25ml agarose beads (沉淀物)。 本产品标注的体积为悬浊液总体积。