柱式动物胞浆蛋白提取试剂盒(细胞样品,非变性提取,不含去垢剂)

(Column Animal Cells Native Protein Extraction Kit，Detergent-free)

● 产品简介

蛋白提取过程中经常使用去垢剂裂解细胞，如NP-40，Triton X-100，SDS等。然而这些去垢剂会对提取的蛋白后续功能研究产生影响。如去垢剂会影响蛋白的荧光标记；高浓度的去垢剂会影响蛋白互作研究；阴离子去垢剂如SDS提取得到变性蛋白，不利于蛋白活性研究；含去垢剂的蛋白样品能与考马斯亮蓝G-250结合，影响Blue Native电泳的分离效果。

本试剂盒采用不含去垢剂的裂解缓冲液，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后结合离心柱离心，有效破坏细胞膜，释放出细胞内蛋白，然后通过离心得到活性蛋白。另外，裂解缓冲液中也不含有还原剂如DTT和BME等，能有效保持蛋白的天然结构。

对于细胞样品，如果每个样品的数量为5×106个细胞，本试剂盒可以抽提50个样品。

使用该产品提取的蛋白可以用于普通非变性电泳（Laemmli系统）（货号：RTD6130，RTD6135）或Blue Native系统（货号：RTD6140）。

注：由于提取缓冲液的适用性，本试剂盒主要提取得到的是胞浆内的可溶性蛋白，对细胞膜蛋白，细胞器蛋白，细胞核蛋白提取效率不高，不建议使用。

● 产品组成

●  贮存、效期及运输：

按照标签温度贮存；有效期一年；常温运输。

● 用前必读：

1. 离心机请调整成RCF/g模式，按照离心力设置离心机（不要根据转速rpm模式设置），所有离心步骤都需要在4℃低温离心机中进行。

2. 溶液混匀后放置于冰上。将离心柱套入2 ml连盖收集管中，盖好管盖，放置于冰上预冷。

3. 蛋白提取推荐添加蛋白酶抑制剂（自备，试剂盒不提供），根据蛋白酶抑制剂母液浓度提前添加在裂解缓冲液中（添加时按照1:100添加，即1ml裂解缓冲液 添加10 μl抑制剂）。研究蛋白磷酸化，需要添加磷酸酶抑制剂（自备，试剂盒不提供）。

4. 蛋白定量推荐使用BCA方法，可以选择BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：RTP7102）。