碧云天研发生产的Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green)，也称Biotin FISH Kit for RNA (Green)，即生物素绿色荧光原位杂交RNA检测试剂盒，是一种通过将生物素标记的寡核酸探针(DNA或RNA)与细胞或组织中的目标RNA按碱基互补配对原理进行杂交，形成生物素标记核酸探针与目标RNA的杂交复合物，再与Alexa Fluor 488标记的Streptavidin (Streptavidin-488)结合，随后就可以在荧光显微镜下观察并确定目标RNA细胞内定位的高灵敏度检测试剂盒。

Streptavidin是一种4聚体蛋白，可以同时高度特异性地结合4个生物素分子，是一种天然存在的生物分子相互作用体系。生物素与Streptavidin的结合系统，被称为生物素-链霉亲和素系统，该系统是一种具有高度亲和力、高灵敏度、特异性强和稳定性好等优点的信号放大技术，已广泛应用于多种检测系统，如原位杂交、免疫检测、DNA杂交检测、免疫组化、流式细胞分析、目标分子的纯化和表征等，有利于信号放大和增加检测灵敏度。

Streptavidin-488可以高度特异地结合生物素标记核酸探针与目标RNA的杂交复合物。Alexa Fluor 488是一种常用的绿色荧光探针，最大激发波长为493nm，最大发射波长为519nm，在荧光显微镜下可以观察到非常明亮的绿色荧光。

本试剂盒背景低、灵敏度高。本试剂盒提供了专门的乙酰化试剂，并且提供了单独的封闭试剂Yeast RNA (100X)，能有效降低背景，提高检测灵敏度。

本试剂盒样品适用范围广。本试剂盒可用于多聚甲醛或福尔马林固定的组织、石蜡或冰冻切片以及细胞等样本的靶RNA的定位分析。本试剂盒适用于样品的异质性(sample heterogeneity)检测，非编码RNA (包括miRNA和lncRNA等)的单细胞水平的高灵敏度检测，基因组来源RNA的追踪检测以及目标RNA的高通量单细胞定量检测(high-through single-cell quantitation)。

本试剂盒可以提供目标RNA的单细胞空间分布信息。基因的表达分析通常采用转录组测序、qPCR、Northern、基因微阵列芯片等技术[1]，尽管这些技术提供了大量信息，但这些检测方法很容易掩盖单细胞基因表达的差异性，特别是RNA在细胞内的空间分布特性，采用本试剂盒可以特异且高灵敏地揭示单细胞水平基因表达的空间分布情况。

本试剂盒兼容后续荧光染色。本试剂盒具有较好的荧光兼容性，除特异杂交的荧光信号外，还可以配合DAPI (C1002/C1005/C1006), Hoechst 33342染色液(C1025/C1026), Hoechst 33258染色液(C1017/C1018), Propidium Iodide (ST511/ST512)等荧光染料。

碧云天Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green)使用生物素标记探针检测HeLa细胞18S rRNA的原位杂交效果请参考图1。

图1.碧云天研发生产的Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green) (R0307)用于HeLa细胞18S rRNA的荧光原位杂交(FISH)检测效果图。图A为使用阴性对照探针1µg/ml Biotin-18S rRNA sense probe的FISH检测效果图，图B为DAPI染色效果图，图C为图A和图B的叠加图效果；图D为使用阳性生物素标记探针1µg/ml 18S rRNA Biotin FISH Probe (R0333)即Biotin-18S rRNA antisense probe的FISH检测效果图，图E为DAPI染色效果图，图F为图D和图E的叠加效果图。Scale Bar均为20µm。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

-20ºC保存，一年有效。Proteinase K (20mg/ml)和Yeast RNA (100X)须-20ºC保存；Hybridization Solution， Streptavidin-488和DAPI须-20ºC避光保存；Acetylation Solution A, Acetylation Solution B，Streptavidin Buffer (5X)和Wash Buffer (20X)可4ºC或室温保存。

建议尽量使用新鲜样品进行FISH检测，固定后保存的样品，RNA通常会随着时间的延长而逐步发生降解，影响FISH的检测效果。

需要自备的试剂：BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)或DEPC水(R0021/R0022)、4%多聚甲醛固定液(P0099)、PBS, pH7.3 (DNase, RNase & Protease free, Sterile) (ST477)、BSA (Fatty Acid & IgG Free, BioPremium) (ST025)、盐酸、Formamide deionized、抗荧光淬灭封片液(P0126)、多聚赖氨酸(C0312/C0313/ST508/ST509) (酌情自备)、盖玻片(FCGF24/ FCGF22) (酌情自备)、冰冻或石蜡切片相关试剂(酌情自备)、目标RNA生物素探针(须自行购买或合成)。

对于常规的哺乳动物细胞或组织样品的检测，Hybridization Solution使用前通常可以添加Yeast RNA后使用，可以有效降低背景。对于Yeast RNA可能产生干扰的情况，可以不添加Yeast RNA。

建议Hybridization Solution、Streptavidin-488适当分装后避光保存。

预杂交温度确定后，通常后续的探针预处理、杂交、洗涤的温度宜保持一致。

任何一种试剂都必须全部解冻并混匀后使用。

由于涉及 RNA 操作，需要严格按照 RNA 操作的规范进行，避免 RNase 污染。实验中用到的吸头、离心管和检测涉及的器具和相关溶液都必须是无RNA酶污染的(RNase free)。推荐使用碧云天生产的BeyoGold™系列中明确标注RNase free的耗材产品。实验中用到的玻璃或塑料器具、仪器设备、桌面等表面也尽量进行RNase free处理。推荐清洗或擦拭后使用碧云天生产的R0127 RNase, DNase, RNA and DNA Away参考产品说明书通过喷雾处理快速、便捷、高效地清除实验仪器、设备、器具表面的RNase污染。RNase, DNase, RNA and DNA Away处理后，仪器设备等表面可以使用洁净纸巾擦拭干净，和样品直接接触的器具表面可以使用不含RNase的超纯水适当冲洗数次。不含RNase的超纯水推荐使用碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)或R0021/R0022 DEPC水(DNase、RNase free)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。