【产品概述】
本试剂盒含有新一代逆转录酶和优化的缓冲体系,可以从极低量的总 RNA 或 poly(A) mRNA 合成第一链 cDNA,合成的 cDNA 产量高,也适用于 GC 含量高、二级结构复杂的 RNA 模板。与普通逆转录酶系统相比,具有逆转录能力强(合成较多全长 cDNA)、无 RNase H 活性、热稳定性高和半衰期长等优点。试剂含有反转录反应所需的全部试剂(Cofitt Plus Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)20/Random N6,dNTPs)。本制品含有去基因组成分新型 dsDNase,能够特异性去除双链 DNA,而不消化 RNA 样品、逆转录引物及合成的 cDNA,并且具有热敏感性,可在 55℃快速地不可逆失活,实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。合成的第一链 cDNA 能直接用于 PCR 或荧光定量 PCR 的模板,第二链 cDNA 的合成或线性 RNA 扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链 cDNA 的实验。
【产品特点】
1、所有模板和组分只经历一次混合,即可反应,无需中途再添加,操作简便;
2、热稳定性高,反应温度 42-55℃,有助于 RNA 二级结构打开,大幅提高热稳定性和 cDNA 合成效率;3、无 RNase H 活性,可避免第一链 cDNA 合成过程中,RNA/DNA 杂交模板链中 RNA 降解,保证 cDNA 合成的质量;
4、Random N6 和 Oligo(dT)20 引物比例经过优化,可均匀合成样品中的 cDNA;
5、含有去基因组成分,反转录时可同步去除基因组 DNA 污染,无需单独添加,方便快捷;
6、合成片段≤15 kb。
【产品组分】
组分货号 | 组分名称 | 组分规格 |
LBQ7513-001 | 5×Cofitt® Super Reaction Mix*¹ | 400 μl |
LBQ7513-002 | Cofitt® Plus Enzyme Mix*² | 300 μl |
LBQ7513-104 | RNase Free Water | 1 ml×2 |
*1: 包含 Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer mix
*2: 包含 ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor 和 dsDNase
【注意事项】
1、请使用高质量的 RNA 模板进行试验,1~2 μg RNA 反转后大约能得到 0.7-1.5 μg cDNA,建议稀释 3 ~ 5 倍后使用。
2、使用之前请将试剂完全溶解并充分混匀,以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3、以 RNA 为模板获得全长的第一链 cDNA,其起始位点由所用引物所决定:
a、随机引物(Random Primer)在 RNA 模板上没有特异性结合位点,所有 RNA 都可以做为第一链 cDNA 合成的模板;
b、Oligo dT Primer 只能以 poly(A) mRNA 作为 cDNA 合成的模板;
c、采用序列特异性引物(Gene Specific Primer)以其结合位点为起始位点。
4、合成的第一链 cDNA 产物可直接加入 PCR 反应混合物中进行扩增,但加入体积不应超过 PCR 反应总体系的 10%,否则可能影响目的片段的产量。