PureCol 胶原蛋白被称为所有胶原蛋白的标准,用于纯度(> 99.9%胶原蛋白含量),功能性和原生的胶原蛋白。PureCol是从牛皮中分离出来的,这些牛皮源自美国受控的封闭牛群。先进的BioMatrix制造工艺符合严格的质量标准,已经证明可以产生的批次一致性。
PureCol®胶原蛋白约为97%I型去端肽胶原蛋白,其余为III型胶原蛋白。它含有通过凝胶渗透色谱法测量的高单体含量。PureCol®胶原蛋白的浓度约为3 mg / ml。每个特定批次的浓度在购买每种产品时可获得的分析证书上提供。PureCol®是可溶性去端肽胶原在0.01 N HCl中,因此,pH约为2.0。PureCol®胶原蛋白是表面涂层的理想选择,可为细胞培养提供薄层,或用作固体凝胶。
PureCol®胶原蛋白以易于使用的包装形式提供,可供使用和储存。PureCol®经过无菌过滤,可作为即用型溶液提供。
注意:使用这些建议作为指导,以确定培养系统的宜包被条件。
1. 从瓶中取出所需量的胶原蛋白并分配到稀释容器中。
2. 稀PureCol ®在水中〜50至100μg/ ml(约1:30)。也可以使用0.01N HCl溶液。
3. 轻轻旋转内容物直至材料*混合。
4. 添加稀释PureCol适量®材料到培养表面确保整个表面被涂覆。
5. 在室温下孵育,覆盖1-2小时。吸入任何剩余的材料。或者,在室温下孵育直至表面干燥。
6. 用无菌介质或PBS仔细冲洗涂层表面,避免划伤表面。
7. 涂层表面即可使用。如果保持无菌,它们也可以在2-10°C的潮湿条件下储存或风干。
3-D凝胶制备程序
1. 将1份冷冻的10X PBS或10X培养基缓慢加入8份冷冻胶原溶液中,轻轻旋转。
2. 使用无菌0.1M NaOH将混合物的pH调节至7.0-7.5。仔细监测pH值调节(pH计,酚红或pH纸)。
3. 用无菌水将终体积调整为总共10份。
4. 为防止凝胶化,将混合物的温度保持在2-10°C。
5. 为了形成凝胶,加热至37℃。凝胶形成约90至120分钟。
为了证明细胞附着,将细胞接种到涂有基质产物的表面上,并接种到阴性对照表面上,没有基质产物。使用无血清DMEM培养基将细胞接种到表面上。用含有1%BSA的溶液封闭所有表面。然后使细胞在37℃下附着一(1)小时。用DPBS洗涤培养表面。结果表明使用基质产品涂覆的表面具有显着的细胞附着。