碧云天研发的苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (Malate Dehydrogenase Activity Assay Kit with WST-8, Malate Dehydrogenase Assay Kit with WST-8 or MDH Assay Kit with WST-8)，简称MDH活性检测试剂盒或MDH检测试剂盒，是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法，快速、高灵敏地对组织或细胞样品以及血清和血浆等生物体液等样品中苹果酸脱氢酶活性进行检测的试剂盒。

苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase, MDH)是细胞内的一种氧化还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物等生物体中，是生物糖代谢的关键酶之一，能催化苹果酸和草酰乙酸的相互转化。MDH在细胞的多种生理活动中起着重要的作用，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统及植物的活性氧代谢等[1]。

苹果酸脱氢酶有多种同工酶，但在真核细胞中有两种主要的异构体，即存在于线粒体中的m-MDH和存在于细胞质的c-MDH。m-MDH在线粒体中主要催化苹果酸脱氢(氧化)，是三羧酸循环中的重要酶之一，对体内营养物质的彻底氧化或相互转变均起重要作用；c-MDH定位于胞质，主要催化草酰乙酸加氢(还原)，是苹果酸-天冬氨酸穿梭系统保证胞质中糖酵解生成的NADH进入线粒体、彻底氧化产能的重要酶类[1,2]。MDH在维持机体的正常生命活动中扮演着重要的角色，临床研究表明在心肌梗死初期和病毒性肝炎初期血清MDH活性都会明显升高，此外在肾脏疾病、类风湿和风湿性疾病、创伤性休克、血液系统疾病等，也可见血清MDH活性不同程度的升高。因此，MDH的活力测定对于了解相关的代谢状况以及对于临床相关疾病诊断、预防等具有重要意义。

本试剂盒的检测原理如图1所示。在苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase, MDH)的作用下，L-苹果酸(L-Malate)被氧化生成草酰乙酸(Oxalacetic acid, OAA)，在这一反应过程中NAD+被还原为NADH；生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium methyl sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中苹果酸脱氢酶的活力成正比。

图1.碧云天苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0514)检测原理图。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒在样品体积为20µl时可以检测活性低至13µU的苹果酸脱氢酶，在0.67-33.3U/L活力范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了苹果酸脱氢酶作用产物NADH的标准溶液，可以通过设置标准曲线(图2)，从而计算出样品中的苹果酸脱氢酶的活力。

图2.碧云天苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0514)对NADH标准曲线、阳性对照、HeLa细胞及小鼠不同组织样品的检测效果。左图为本试剂盒对标准品NADH的检测效果，在20-1000μM浓度范围内有良好的线性关系；右图为阳性对照(Positive control)、0.4μg蛋白量HeLa细胞样品(HeLa cell)、0.6μg蛋白量小鼠肌肉裂解样品(Mouse muscle)和0.8μg小鼠肝脏裂解样品(Mouse liver)在反应30分钟内的吸光度变化图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。

本试剂盒使用灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆等生物体液、细胞培养上清以及组织或细胞等样品的检测，全程约1小时即可完成。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒小包装可以进行100次检测。

-20ºC保存，一年有效。其中显色液、底物及NADH须避光保存。NADH配制成溶液后，须适当分装后-80ºC保存。

BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay、MDH检测缓冲液(后续简称检测缓冲液)、显色液和底物需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它试剂在使用时应在冰上进行。

底物从-20ºC拿出在融解过程中可能会有析出，平衡至室温后析出的部分会溶解，不会对检测结果产生影响。

NADH不太稳定，配制成溶液后，须适当分装后于-80ºC保存，并尽快使用。如果发现标准曲线不理想，很有可能是标准品NADH发生了降解。

血清等样品如在4ºC保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

为减少稀释液产生的背景带来的误差，样品和标准品的稀释液应该根据样品的种类来定。当样品为BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay制备的细胞或组织的裂解样品时，应使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay稀释，当样品为血液等其他样品时，宜使用检测缓冲液稀释。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。碧云天研发的苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (Malate Dehydrogenase Activity Assay Kit with WST-8, Malate Dehydrogenase Assay Kit with WST-8 or MDH Assay Kit with WST-8)，简称MDH活性检测试剂盒或MDH检测试剂盒，是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法，快速、高灵敏地对组织或细胞样品以及血清和血浆等生物体液等样品中苹果酸脱氢酶活性进行检测的试剂盒。

苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase, MDH)是细胞内的一种氧化还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物等生物体中，是生物糖代谢的关键酶之一，能催化苹果酸和草酰乙酸的相互转化。MDH在细胞的多种生理活动中起着重要的作用，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统及植物的活性氧代谢等[1]。

苹果酸脱氢酶有多种同工酶，但在真核细胞中有两种主要的异构体，即存在于线粒体中的m-MDH和存在于细胞质的c-MDH。m-MDH在线粒体中主要催化苹果酸脱氢(氧化)，是三羧酸循环中的重要酶之一，对体内营养物质的彻底氧化或相互转变均起重要作用；c-MDH定位于胞质，主要催化草酰乙酸加氢(还原)，是苹果酸-天冬氨酸穿梭系统保证胞质中糖酵解生成的NADH进入线粒体、彻底氧化产能的重要酶类[1,2]。MDH在维持机体的正常生命活动中扮演着重要的角色，临床研究表明在心肌梗死初期和病毒性肝炎初期血清MDH活性都会明显升高，此外在肾脏疾病、类风湿和风湿性疾病、创伤性休克、血液系统疾病等，也可见血清MDH活性不同程度的升高。因此，MDH的活力测定对于了解相关的代谢状况以及对于临床相关疾病诊断、预防等具有重要意义。

本试剂盒的检测原理如图1所示。在苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase, MDH)的作用下，L-苹果酸(L-Malate)被氧化生成草酰乙酸(Oxalacetic acid, OAA)，在这一反应过程中NAD+被还原为NADH；生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium methyl sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中苹果酸脱氢酶的活力成正比。

图1.碧云天苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0514)检测原理图。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒在样品体积为20µl时可以检测活性低至13µU的苹果酸脱氢酶，在0.67-33.3U/L活力范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了苹果酸脱氢酶作用产物NADH的标准溶液，可以通过设置标准曲线(图2)，从而计算出样品中的苹果酸脱氢酶的活力。

图2.碧云天苹果酸脱氢酶活性检测试剂盒(WST-8法) (S0514)对NADH标准曲线、阳性对照、HeLa细胞及小鼠不同组织样品的检测效果。左图为本试剂盒对标准品NADH的检测效果，在20-1000μM浓度范围内有良好的线性关系；右图为阳性对照(Positive control)、0.4μg蛋白量HeLa细胞样品(HeLa cell)、0.6μg蛋白量小鼠肌肉裂解样品(Mouse muscle)和0.8μg小鼠肝脏裂解样品(Mouse liver)在反应30分钟内的吸光度变化图。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。

本试剂盒使用灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆等生物体液、细胞培养上清以及组织或细胞等样品的检测，全程约1小时即可完成。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒小包装可以进行100次检测。

-20ºC保存，一年有效。其中显色液、底物及NADH须避光保存。NADH配制成溶液后，须适当分装后-80ºC保存。

BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay、MDH检测缓冲液(后续简称检测缓冲液)、显色液和底物需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它试剂在使用时应在冰上进行。

底物从-20ºC拿出在融解过程中可能会有析出，平衡至室温后析出的部分会溶解，不会对检测结果产生影响。

NADH不太稳定，配制成溶液后，须适当分装后于-80ºC保存，并尽快使用。如果发现标准曲线不理想，很有可能是标准品NADH发生了降解。

血清等样品如在4ºC保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

为减少稀释液产生的背景带来的误差，样品和标准品的稀释液应该根据样品的种类来定。当样品为BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay制备的细胞或组织的裂解样品时，应使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay稀释，当样品为血液等其他样品时，宜使用检测缓冲液稀释。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。