碧云天研发的L-苹果酸检测试剂盒(WST-8法) (L-Malate Assay Kit with WST-8)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法，快速、高灵敏地对组织或细胞样品、血清和血浆等生物体液以及饮料和果汁等样品中L-苹果酸与L-苹果酸盐含量进行检测的试剂盒。

苹果酸(Malate, Malic acid)，又称2-羟基丁二酸，分子式为C4H6O5，分子量为134.09。苹果酸是一种生物体生成的二羧酸，是人体必需的一种有机酸。苹果酸有L-苹果酸和D-苹果酸2种异构体，天然存在的苹果酸几乎都是L型的。L-苹果酸是天然果汁的重要成份，口感接近天然苹果的酸味，与柠檬酸相比，口感更好，产生的热量更低，被誉为“最理想的食品酸味剂”，是目前世界食品工业中用量巨大和发展前景较好的有机酸之一[1-2]。苹果酸是人体内部循环的重要中间产物，易被人体吸收，因此作为性能优异的食品添加剂和功能性食品广泛应用于食品、化妆品、医疗和保健品等领域，已成为继柠檬酸、乳酸之后用量排第三位的食品酸味剂，对苹果酸进行定量测定了解相关状况以及对相关食品的生产等具有重要意义[1-2]。

苹果酸作为三羧酸循环(Tricarboxylic acid cycle, TCA cycle)的重要中间体，在代谢过程中起着重要作用。在植物的C4固定过程中，苹果酸是卡尔文循环中CO2的来源。在低等生物中，苹果酸在苹果酸-乳酸发酵过程中通过二氧化碳的形成转化为乳酸。苹果酸也可以通过植物叶片保卫细胞中磷酸烯醇式丙酮酸的羧化作用合成的。苹果酸作为一种双阴离子，在溶质被吸收到保卫细胞的过程中经常伴随着钾阳离子，以维持细胞内的电位平衡。这些溶质在保卫细胞内的积累降低了溶质电位，使水进入细胞并促进气孔的开口[3]。

本试剂盒的检测原理请参考图1。L-苹果酸在苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase, MDH)的作用下氧化生成草酰乙酸(Oxalacetic acid, OAA)，在这一反应过程中NAD+被还原为NADH；生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium methyl sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中L-苹果酸的含量成正比。

图1.碧云天L-苹果酸检测试剂盒(WST-8法) (S0511)检测原理图。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒能特异性检测L-苹果酸，而不检测D-苹果酸，在样品体积为20µl时可以检测浓度低达20μM的苹果酸，在20-500μM (0.4-10nmol)浓度范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了苹果酸标准溶液，可以通过设置标准曲线(图2)，从而计算出样品中的L-苹果酸含量。

图2.碧云天L-苹果酸检测试剂盒(WST-8法) (S0511)检测苹果酸标准品的标准曲线。本试剂盒测定L-苹果酸标准品，在20-500μM浓度范围内有良好的线性关系。实际检测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。

本试剂盒使用灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液等生物体液，细胞培养上清、组织或细胞样品以及饮料和果汁等样品的检测，全程约0.5-1小时即可完成。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒小包装可以进行100次检测。

-20ºC保存，一年有效。其中显色液和底物须避光保存。

本试剂盒仅能检测L-苹果酸或L-苹果酸盐，不能检测D-苹果酸或D-苹果酸盐。

BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay、苹果酸检测缓冲液(后续简称检测缓冲液)、显色液和底物需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。酶溶液和苹果酸标准溶液使用时应在冰上进行。

底物从-20ºC拿出在融解过程中可能会有析出，平衡至室温后析出的部分会复溶，不会对检测结果产生影响。

血清等样品如在4ºC保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

为减少稀释液产生的背景带来的误差，样品和标准品的稀释液应该根据样品的种类来定。当样品为BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay制备的细胞或组织的裂解样品时，应使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay稀释，当样品为血液等其它样品时，宜使用检测缓冲液稀释。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。