碧云天的Biotin Agarose (生物素琼脂糖凝胶)，也称Biotin琼脂糖凝胶或Biotin Agarose Resin，由高质量的生物素(Biotin)与高度交联的6%琼脂糖共价偶联而成，能够快速、高效、灵敏、特异性地与链霉亲和素(Streptavidin)或亲和素(Avidin)以及偶联了链霉亲和素或亲和素的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化偶联了亲和素或链霉亲和素的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等，用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。

生物素(Biotin)，即维生素B7(Vitamin B7)，也称D-Biotin、维生素H (Vitamin H)、Biso Ⅱ、I、辅酶R (Coenzyme R)，是B族维生素之一[1]。生物素被归类为杂环化合物，具有含硫环稠合脲基(Sulfur-containing ring fused ureido)和四氢噻吩基团(Tetrahydrothiophene group) [1, 2]。含有-N-CO-N-基团的脲基环(Ureido ring)在羧化反应中充当二氧化碳载体。生物素参与碳水化合物的消化、脂肪酸的合成和糖异生(Gluconeogenesis)等代谢过程。核染色质中组蛋白的生物素化在染色质稳定性和基因表达中发挥重要作用。生物素还可作为羧化酶(如丙酮酸羧化酶)的辅助因子，催化丙酮酸和二氧化碳形成草酰乙酸[2]。

生物素是一种小分子，它的存在不会影响大分子的生物学功能。生物素广泛应用于生物素-(链霉)亲和素系统(biotin-(strept)avidin system)，而且生物素是羧化酶的重要辅助因子，存在于各种代谢途径中[2]。生物素与亲和素(Avidin)或链霉亲和素(Streptavidin)的结合有助于将目标分子(抗体、核苷酸、蛋白A等)与标记系统(酶、荧光、化学发光探针)连接起来。这种复合物用于许多检测系统，例如免疫沉淀、免疫组织化学/流式细胞分析、Southern和Northern等。同时，这种方法也适用于各种目标分子的纯化和表征。此外，生物素还可用于培养少突胶质细胞，作为芽孢杆菌属物种生长的维生素补充剂，在免疫组织学过程中阻断内源性生物素[3]。

生物素琼脂糖凝胶在生物医药领域内应用非常广泛，可以特异性地结合(链霉)亲和素偶联的抗原或者抗体，作为免疫沉淀、细胞分选、ELISA等反应的载体；结合(链霉)亲和素偶联的DNA或RNA片段，从细胞或组织提取物中分离特定的核酸-蛋白质复合物，用于蛋白质与核酸相互作用研究；结合(链霉)亲和素偶联的核酸探针，用于DNA、RNA杂交实验或mRNA的分离和纯化等；还可用于纯化单链(链霉)亲和素偶联的DNA寡核苷酸、分离(链霉)亲和素偶联的PCR产物等。本产品的实验流程参考图1。

图1.碧云天Biotin Agarose (生物素琼脂糖凝胶) (P2157)的实验流程图。

本产品结合量容量高。与同类的很多产品相比，本产品具有非常高的结合容量，对复杂样品中(链霉)亲和素偶联的分子可以快速进行分离纯化。本产品中Biotin Agarose为50%的凝胶悬浊液，每毫升Biotin Agarose沉淀中偶联有1-1.5μmol生物素，可结合约10-20mg(链霉)亲和素，可高效地进行免疫沉淀等实验。本产品用于Streptavidin的结合效果参考图2。

图2.碧云天Biotin Agarose (生物素琼脂糖凝胶) (P2157)用于Streptavidin的结合效果图。泳道1为Input，即为Streptavidin；泳道2为本产品结合的Streptavidin，结合后使用1X SDS-PAGE Loading Buffer进行洗脱并进行SDS-PAGE；泳道3为本产品结合Streptavidin后的上清液(FT)。图中约13kDa处的条带为Streptavidin的单体。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品特异性强。本产品可特异性地结合(链霉)亲和素偶联的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等配体分子，获得的产物纯度高，可进一步用于Western、ELISA、Northern、qPCR、质谱分析等一系列后续的分析测试。

本产品使用便捷。本产品储存在特殊保护液中，不含甘油，使用方便。本产品不仅适用于少量样本的检测，也适用于高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统，不同操作方法之间一致性高。

本产品的主要指标如下表：

本产品为50%凝胶悬液，包装体积为总体积，每毫升本产品中共含有0.5ml凝胶沉淀物。如果每个样品使用50μl琼脂糖凝胶悬液，每毫升本产品可以用于20个样品反应。

-20ºC保存，一年有效。4ºC保存，至少一个月有效。

本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使琼脂糖凝胶混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性、琼脂糖凝胶破碎等。

本产品含有微量的防腐剂，使用前宜先用TBS等适当溶液洗涤凝胶3次，以充分消除防腐剂可能产生的干扰。

在免疫沉淀或纯化时，建议设计阳性和阴性对照组。

待结合分子的类型、大小及(链霉)亲和素偶联方式和程度等都会影响结合效率，建议通过梯度稀释法来确定每种具体应用的琼脂糖凝胶用量，同时可以考虑加大琼脂糖凝胶用量至待结合分子2-3倍摩尔数量以确保结合充分。

游离(链霉)亲和素会降低本琼脂糖凝胶对于目标蛋白复合物的结合量，因此在(链霉)亲和素偶联蛋白或核酸后，需要用适当方法去除多余的游离(链霉)亲和素。

蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4ºC或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如碧云天的P1005/P1006蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X)、P1048/P1049蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1010/P1011蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)、P1050/P1051蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)等。

如果离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的琼脂糖凝胶不可重复使用。为了尽量减少生物素的脱落，无论是手动操作还是自动操作，低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。

高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与配体的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液(P0013B/C/D)或NP-40裂解液(P0013F)等都完全适用。碧云天生产的不同裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。