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生物试剂
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一、产品简介：
乙酰辅酶A是能源物质代谢的重要中间代谢产物，在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路--三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用以ATP的合成。它也是合成脂肪酸、酮体、胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD+生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成量成正比，340nm下吸光值的上升量反应了乙酰辅酶A含量的高低。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体60mL×1瓶
4℃保存
试剂一
液体10mL×1瓶
4℃保存
试剂二
粉体mg×1瓶
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底部，再加4.5mL试剂一溶解备用。
试剂三
粉体mg×1瓶
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底部，再加4.5mL试剂一溶解备用。
试剂四
粉体mg×1支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再加0.6mL蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、乙酰辅酶A含量测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约0.1g组织样本，加1mL的提取液，进行冰浴匀浆，粗提液全部转移到EP管中，12000rpm，4℃离心10min，上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min，设定波长至340nm。
② 试剂解冻至室温（25℃），在96孔板中依次加入：
乙酰辅酶A是能源物质代谢的重要中间代谢产物，在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路--三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用以ATP的合成。它也是合成脂肪酸、酮体、胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD+生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成量成正比，340nm下吸光值的上升量反应了乙酰辅酶A含量的高低。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体60mL×1瓶
4℃保存
试剂一
液体10mL×1瓶
4℃保存
试剂二
粉体mg×1瓶
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底部，再加4.5mL试剂一溶解备用。
试剂三
粉体mg×1瓶
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底部，再加4.5mL试剂一溶解备用。
试剂四
粉体mg×1支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再加0.6mL蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、乙酰辅酶A含量测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约0.1g组织样本，加1mL的提取液，进行冰浴匀浆，粗提液全部转移到EP管中，12000rpm，4℃离心10min，上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min，设定波长至340nm。
② 试剂解冻至室温（25℃），在96孔板中依次加入：
