基因型 rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15] 产品说明 JM110菌株具有硫酸链霉素抗性(StrR)；是甲基转移酶dam、dcm缺失的菌株，提取得到的质粒DNA，可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割。甲基转移酶dam、dcm突变导致细胞内基因突变率增加，菌落生长时会产生大小两种菌落，挑菌时尽量挑中等大小或偏小的菌落。lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选，但转化效率不高。JM110感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。 操作方法 1. JM110感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀37℃，200 rpm复苏60分钟。 4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB平板上。 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。 注意事项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 2. dam、dcm突变导致细胞内基因突变率增加，转化效率低，一般用于质粒扩繁，不建议用于质粒构建；JM110菌株不含卡那霉素抗性基因，但对卡那霉素敏感度低，在LB(kan 50ug/ml)平板划线或涂板时会长出零星小菌落。 3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）