基因型 ∆(mcrA)183 ∆(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F´proAB lacIqZ∆M15 Tn5 (KanR)] 产品说明 XL1-Blue MRF’Kan菌株来源于XL1-Blue株系，是限制酶系统缺失型[∆(mcrA)183, ∆(mcrCB-hsdSMR -mrr)173],，且具有卡那霉素抗性 (KanR)，可转化具有氯霉素或四环素抗性的质粒。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdR17突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。 lacIqZΔM15 的存在使XL1-Blue MRF’Kan菌株可用于蓝、白斑筛选。XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>108 cfu/μg DNA。 操作方法 1. XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA并用手拨打EP管底充分混匀，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或 LB培养基上。 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。 注意事项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 2. XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞具有卡那霉素抗性，不可转化具有卡那霉素抗性的质粒。 3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）