基因型 F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 产品说明 Stbl2菌株来源于 JM109 E. coli strain，适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列，逆转录病毒序列等)；mcrA突变和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列；同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>109 cfu/μg DNA。 操作方法 1. Stbl2感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入0.9 mL室温S.O.C.或LB培养基(S.O.C.营养丰富，可提高转化效率)。 4. 37℃，225 rpm复苏60分钟或30℃，225 rpm复苏90分钟。 当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟 5. 5000 rpm离心1分钟收菌，留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.或LB培养基上。 6. 将平板倒置放于37℃或30℃培养箱过夜培养。 当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜 注意事项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可减少最终用于涂板的菌量。 2. S.O.C.或LB培养基均可使用，S.O.C.可提高转化效率20%；实验人员可选择在37℃或30℃培养细胞，37℃条件下，菌生长速度加快，有利于提高质粒产量，30℃培养可降低错误重组概率。 3. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）