基因型 F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) ϕ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galE15 galK λ-rpsL nupG 产品说明 DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ϕ80lacZ∆M15 marker的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。DH10B感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>108 cfu/μg DNA。 操作方法 1. DH10B感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入700 μl不含 抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13 h。 注意事项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 2. 混入目的DNA时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOC的2倍）