基因型 endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)] 产品说明 BJ5183-AD-1是携带了腺病毒质粒pAdEasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变，赋予BJ5183细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒pAdEasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该菌株氨苄抗性，在病毒 质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。StrR 赋予BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。BJ5183-AD-1感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBI A2301质粒(size:1163bp，KanR)检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA。 操作方法 1. BJ5183-AD-1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒（含有目标基因并线性化），并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 4. 5000 rpm离心1分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。 注意事项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 2. 混入目的DNA时应轻柔操作。 3. BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁，纯化质粒。 4. BJ5183-AD-1感受态细胞对温度敏感，应储存在-80℃超低温冰箱，避免温度波动，以免感受态转化效率降低。