基因型 F- recA endA1 mcrA (mcrB, mrr, hsdR, hsdM) Aimm434nin5X1-CRE 产品说明 NS3529菌株是一种表达CRE酶的大肠杆菌菌株。 此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证质粒DNA 的稳定性。同时NS3529菌株可表达来自P1噬菌体的CRE酶，可用于利用Cre-LoxP系统的进行重组的大质粒构建或人工染色体合成。NS3529感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。 操作方法 1. NS3529感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。 注意事项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 2. 混入目的DNA时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。