基因型 F′ proAB+ lacIqZ∆M15 Tn10 (TetR)mcrA ∆(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal- thi-1 supE44 λ- relA1∆(lac-proAB) 产品说明 Stbl4菌株来源于 Stbl2 E. coli strain，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建。Stbl4菌株适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列，逆转录病毒序列等)；mcrA突变和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列。recA 1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacIqZΔM15标记使得Stbl4菌株可用于蓝、白斑筛选，此菌株具有四环素抗性。唯地生物生产的Stbl4电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>0.5×1010 cfu/μg DNA，特别适合慢病毒质粒文库或逆转录质粒文库的构建。 操作方法 1. 取适量SOC放37度预热1-2小时（每管感受态准备10ml SOC）。 2. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。 3. 取-80℃保存的Stbl4电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19； B. 对于连接产物，部分公司的T4连接酶体系或重组体系可与电击感受态混合后电击转化，无需进行DNA纯化，但DNA浓度不能过高，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。 C. 对离子浓度较高的DNA溶液或反应体系请用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA，ddH2O溶解后电击转化。 4. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。 5. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，15秒内加入0.9ml预热的SOC（此步骤可在电转仪旁操作，无需在超净台操作），用1ml 枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。30℃，225 rpm复苏90分钟。当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟 6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的LB平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养17-20小时或30℃培养箱过夜培养20-24小时。若转化control pUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜。  7.若要获得大量，高纯度质粒，建议在TB培养基（唯地CAT#：CM1018L）中30度/37度摇菌培养（以标准质粒PUC19为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产量为LB的3-4倍，SOB的2倍） 注意事项 1. Stbl4电击感受只能电击转化，不可用热激方法转化。加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。 2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。 3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。 4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。 5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 6. 对于连接产物，最好用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA后用适量ddH2O或TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。 7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。